环境样本中原核生物的总量测定—16srrna基因荧光定量pcr (sybr green染料法)
时间: 2023-09-17 09:00:40 浏览: 56
环境样本中原核生物的总量测定是通过使用16S rRNA基因荧光定量PCR (SYBR Green染料法)来实现的。
16S rRNA是原核生物中常见的核糖体RNA分子,其具有高度保守性和变异性,因此广泛用于鉴定和分类原核生物。荧光定量PCR是一种快速、灵敏和特异性的PCR技术,通过同时测定模板DNA的扩增产物和荧光信号强度,可以实现准确测定样品中原核生物的数量。
首先,从环境样本中提取总DNA,包括细菌和古菌的DNA。然后,使用16S rRNA基因特异性引物和SYBR Green染料,进行荧光定量PCR反应。SYBR Green是一种DNA结合染料,只有与DNA结合扩增产物时才会发出荧光信号。
在PCR反应中,引物与样品中的16S rRNA基因扩增产物特异性结合,SYBR Green染料结合到扩增产物上,形成荧光复合物。随着PCR的进行,16S rRNA基因扩增产物的数量增加,与之相应的荧光信号也增加。利用荧光PCR仪检测扩增反应体系中的荧光信号强度,并将其与标准曲线进行比较,即可计算出样品中原核生物的总量。
这种16S rRNA基因荧光定量PCR技术具有高度灵敏性和特异性,可以准确测定环境样本中原核生物的数量。因此,它在环境微生物学研究中被广泛应用,帮助科学家们深入了解原核生物的分布、组成和功能。