western blot 为什么跑不出来

Western blot 可能无法跑出来的原因有很多，以下是一些可能的原因：

1. 样品质量不好：如果样品中的蛋白质含量太低或者质量不好，那么 Western blot 可能无法跑出来。

2. 蛋白质转移不完全：如果蛋白质没有完全转移到膜上，那么 Western blot 可能无法跑出来。

3. 抗体不好：如果使用的抗体不好，那么 Western blot 可能无法跑出来。

4. 电泳条件不好：如果电泳条件不好，比如电流不稳定或者时间不够，那么 Western blot 可能无法跑出来。

5. 膜的质量不好：如果使用的膜质量不好，比如膜老化或者质量不稳定，那么 Western blot 可能无法跑出来。

总之，Western blot 无法跑出来的原因有很多，需要仔细检查每一个步骤，找出问题所在。

相关问题

如何使用ImageJ进行Western Blot图像的定量分析，并确保高对比度条带的精确测量？

要进行Western Blot图像的定量分析并确保高对比度条带的精确测量，首先需要对ImageJ软件有深入的理解，特别是如何处理和分析图像数据。推荐的教程《ImageJ实用教程详解：全方位深度解析与案例》可以在这方面为你提供巨大的帮助。

参考资源链接：[ImageJ实用教程详解：全方位深度解析与案例](https://wenku.csdn.net/doc/3a5kh99wo4?spm=1055.2569.3001.10343)

在操作上，首先需要将Western Blot的图像导入ImageJ软件。可以通过菜单栏的'File' -> 'Open'来选择相应的图像文件。随后，利用'Analyze' -> 'Gels' -> 'Select First Lane'来选择条带区域，这是进行定量分析的第一步。接着，使用'Analyze' -> 'Gels' -> 'Plot Lanes'命令绘制每个条带的强度曲线。

为了提高测量的精确度，尤其是在条带对比度较低的情况下，可以调整图像的对比度和亮度（通过'Image' -> 'Adjust' -> 'Brightness/Contrast'），确保条带与背景的对比度最高，同时避免出现饱和值。之后，使用'Analyze' -> 'Set Measurements'设置所需的测量参数，例如面积、平均灰度等。

为了更精确地定位和量化条带，可以使用'Analyze' -> 'Set Scale'确保图像的尺寸和条带的实际大小相对应。最后，通过'Analyze' -> 'Gels' -> 'Lane Molecular Weight'可以根据条带的迁移率计算分子量，并输出一个包含测量数据的表格。

除了上述操作，ImageJ的扩展插件DeepImageJ也可以用来进行更为复杂的图像分析。如果你需要进行大量图像的处理和分析，可以考虑利用GPU加速功能来提高效率。这些工具和功能都在《ImageJ实用教程详解：全方位深度解析与案例》中有所介绍，它们将帮助你更全面地掌握ImageJ的高级应用，并解决实验中遇到的具体问题。

参考资源链接：[ImageJ实用教程详解：全方位深度解析与案例](https://wenku.csdn.net/doc/3a5kh99wo4?spm=1055.2569.3001.10343)

翻译：Western blot检测了T24细胞中重要信号通路的关键因子AKT及其相应的磷酸化形式p-AKT。结果显示，LIEN显著降低了p-AKT和p-STAT3的表达，并呈剂量依赖性(图5c)，但AKT总表达量无统计学差异。研究发现PI3K/AKT信号通路与膀胱癌的增殖、分化和进展密切相关。通过KEGG富集分析我们发现PI3K/AKT信号通路在LIEN抑制T24细胞增殖的过程中发挥重要作用。因此我们利用Western blot技术检测了AKT和p-AKT的表达发现，LIEN能够明显抑制p-AKT的活性，但为总的AKT表达并无显著影响。而在前面的分析中发现LIEN也许能直接调控PIK3CA(PI3K的α亚基)，因此我们利用Western blot检测LIEN对PIK3CA表达的影响，发现LIEN能够呈浓度依赖性降低PIK3CA的表达。这表明LIEN可能通过PIK3CA/AKT信号通路抑制T24细胞的增殖能力。

回答：这是一篇关于细胞信号通路的研究文章，通过Western blot技术检测了AKT和p-AKT的表达，发现LIEN能够明显抑制p-AKT的活性，但对总的AKT表达并无显著影响。同时，研究发现PI3K/AKT信号通路在LIEN抑制T24细胞增殖的过程中发挥重要作用。通过KEGG富集分析，发现PI3K/AKT信号通路与膀胱癌的增殖、分化和进展密切相关。此外，LIEN也许能直接调控PIK3CA(PI3K的α亚基)，能够呈浓度依赖性降低PIK3CA的表达，这表明LIEN可能通过PIK3CA/AKT信号通路抑制T24细胞的增殖能力。