植物基因敲除是怎么敲除的

时间: 2023-05-27 19:02:49 浏览: 109
植物基因敲除通常是通过CRISPR/Cas9技术来实现的。CRISPR/Cas9是一种基因编辑技术,它可以针对目标基因的DNA序列进行精确的切割和编辑。通过设计合适的引物,CRISPR/Cas9可以精确地把目标基因的DNA序列切断,从而实现基因敲除的目的。经过CRISPR/Cas9编辑的植物细胞会的基因组会相应地发生改变,导致目标基因不能正常表达,从而实现基因敲除的效果。
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基因稳定敲除细胞株构建

构建基因稳定敲除细胞株的步骤与构建稳定敲除细胞株的步骤类似,但是需要将sgRNA针对的基因区域设计为包含启动子、外显子和内含子等区域,以确保完全敲除目标基因。 基因稳定敲除细胞株构建步骤如下: 1.设计合适的sgRNA:针对目标基因设计合适的sgRNA,确保具有高的敲除效率和特异性。 2.合成sgRNA和Cas9蛋白:将sgRNA和Cas9蛋白进行合成或表达。 3.转染:将sgRNA和Cas9蛋白导入目标细胞中,一般采用质粒转染或病毒载体转染。 4.筛选:经过转染后,需要对细胞进行筛选,筛选出成功敲除目标基因的细胞克隆。 5.鉴定:对成功筛选出的细胞克隆进行鉴定,使用PCR、Western blot等方法检测目标基因的敲除效果。 6.扩增:对成功鉴定的细胞克隆进行扩增,得到基因稳定敲除细胞株。 需要注意的是,在设计sgRNA时,需要考虑基因可能存在的剪切变异或启动子区域的甲基化等情况,以确保敲除效率和特异性。同时,在筛选过程中,也需要考虑可能存在的假阳性或假阴性情况,确保鉴定结果的准确性。

基因工程在植物新品种培育中的研究进展文献综述

以下是基因工程在植物新品种培育中的研究进展文献综述: 1. Cao J, Zhao L, Huang J, et al. 基因编辑在植物育种中的应用[J]. 中国农业科学, 2018, 51(8): 1359-1370. 本文介绍了基因编辑在植物育种上的应用,包括CRISPR/Cas9技术在水稻、小麦、玉米等作物中的应用。此外,还介绍了其他基因编辑技术如TALEN和ZFN的应用。 2. Zhang Y, Liang Z, Zong Y, et al. CRISPR/Cas9基因组编辑技术在植物育种中的应用[J]. 植物学报, 2016, 51(1): 1-10. 本文介绍了CRISPR/Cas9基因组编辑技术在植物育种中的应用,包括基因敲除、基因替换、基因增加和基因调控等方面的应用。此外,还介绍了基因组编辑技术的优点和局限性。 3. Li X, Wang Y, Chen S, et al. 基因编辑在植物育种中的应用前景[J]. 遗传学报, 2018, 45(6): 556-570. 本文综述了基因编辑技术在植物育种中的应用前景,包括基因编辑技术的发展趋势、基因编辑技术在植物育种中的应用现状和未来发展方向。同时,还对基因编辑技术的安全性和伦理问题进行了讨论。 4. Doudna J A, Charpentier E. The new frontier of genome engineering with CRISPR-Cas9[J]. Science, 2014, 346(6213): 1258096. 本文介绍了CRISPR/Cas9基因编辑技术的发展历程、原理和应用前景。此外,还介绍了其他基因编辑技术的优缺点和局限性。 5. 张志强, 王鑫, 刘文娟. 基因编辑技术在植物育种中的应用[J]. 遗传, 2016, 38(6): 485-496. 本文介绍了基因编辑技术在植物育种中的应用,包括基因敲除、基因替换、基因增加和基因调控等方面的应用。同时,还介绍了基因编辑技术的发展历程、原理和优缺点。

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