重组水蛭素-HV3-RGD融合蛋白在枯草芽孢杆菌中的表达研究

"水蛭素-RGD序列融合蛋白基因在枯草芽孢杆菌中的克隆及表达 (2005年)" 这篇2005年的自然科学论文聚焦于生物技术领域的一个重要应用，即在微生物中合成具有特定功能的融合蛋白质。研究者们将水蛭素（ Hirudin）基因与RGD（Arg-Gly-Asp）序列融合，以创建一种新的抗栓药物候选分子。水蛭素是一种从医用水蛭唾液腺中提取的多肽，以其强大的凝血酶抑制活性而知名，对血栓性疾病治疗具有潜在价值。它的分子量约为7kD，并且由于其高特异性和低毒副作用，被认为是理想的抗凝血剂。 RGD序列是存在于纤维蛋白原等细胞粘附因子中的一个短肽序列，能够与活化的血小板上的纤维蛋白原受体GPIIb/IIIa结合，从而触发血小板聚集，参与血栓形成。通过将RGD序列与水蛭素融合，可以制造出一个双重功能的抗栓剂，既能够抑制凝血酶，又能阻止血小板聚集。 论文中首次报告了将重组水蛭素HV3与RGD序列融合蛋白基因成功克隆到枯草芽孢杆菌的表达载体pUBH中。枯草芽孢杆菌是一种常用的工业微生物，因其易于遗传操作和高效表达外源基因而被广泛应用于生物工程。实验采用了实验室保存的枯草芽孢杆菌DB403菌株以及特定的表达质粒和PCR技术进行基因克隆。 实验过程包括了质粒提取、PCR扩增、限制性内切酶消化、连接反应等常规分子生物学步骤。融合基因的表达是在富含大豆成分的培养基中进行的，通过诱导表达后，收集菌液并进一步纯化融合蛋白。3kD截留分子量的超滤膜被用来浓缩和纯化目标蛋白。 这项工作展示了在微生物中表达复杂生物活性蛋白的可能性，对于开发新型抗血栓药物具有重要意义。通过这种方式，研究人员能够利用生物工程技术创造出具有创新治疗效果的融合蛋白，为临床治疗提供新的策略和工具。