绿色木霉AS3.3711葡聚糖内切酶I基因克隆与在酵母中的高效表达

本文报道了绿色木霉AS3.3711的葡聚糖内切酶I（EGⅠ）基因的克隆与在酿酒酵母中的表达研究。作者首先采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）技术，成功地从绿色木霉AS3.3711中获取了EGⅠ的cDNA序列。经过测序验证后，cDNA基因被整合到了酿酒酵母的诱导型表达载体pYES2上。实验步骤包括将转化酵母接种在含有2%的β-D-半乳糖的培养基中，以诱导目的基因的表达。 EGⅠ的cDNA开放阅读框长度达到了1377bp，编码了459个氨基酸，推算出其蛋白质分子量约为48.1kDa。研究结果显示，转化后的酿酒酵母能够产生具有生物活性的EGⅠ，并通过细胞外分泌。通过刚果红染色法，观察到明显的水解圈，证明了酶的降解作用。同时，利用CMC糖化力法进行了酶活性的定量检测，发现酶活在60小时培养后达到峰值，即每毫升0.06U。 酶的最适条件也得到了探讨，最适酶解温度为50℃，最适pH值为5.4，这些数据对于理解EGⅠ在酿酒酵母中的高效表达及其功能具有重要意义。此外，该研究还涉及到绿色木霉、葡聚糖内切酶I和酿酒酵母等关键词，这些关键词在生物质转化、工业微生物学和酶工程技术等领域具有广泛的学术价值。 这项工作不仅提供了绿色木霉AS3.3711的EGⅠ基因在酿酒酵母中的有效表达模型，也为后续的生物技术应用，如生物降解、生物质转化或酶制剂的研发，奠定了基础。同时，这也体现了自然科学领域，特别是微生物基因工程的研究进展和实际应用潜力。