ELP标签Amuc_1100重组蛋白的表达、纯化与活性研究

"Amuc_1100的表达、纯化及活性探究" 这篇论文主要研究了Amuc_1100基因的原核表达、纯化及其在细胞和动物水平上的生物学活性。Amuc_1100是一种可能具有生物功能的蛋白质，研究人员旨在通过大肠杆菌的表达系统来生产并纯化它，以便进一步探索其潜在作用。 1. 基因表达载体构建：研究人员设计并合成了一个名为pET28a-Amuc_1100-ELP的重组质粒。在这个载体中，Amuc_1100基因被插入到pET28a表达载体中，并与ELP（Elastin-like Protein）融合。ELP作为一种纯化标签，能够帮助在表达过程中识别和分离目标蛋白。 2. 大肠杆菌表达系统：选择BL21（DE3）作为表达宿主细胞，因为这种菌株对诱导剂的感受性较高，能够高效表达外源基因。通过诱导，Amuc_1100-ELP融合蛋白在大肠杆菌内得以表达。 3. 纯化技术：利用ELP的独特性质——可逆相变循环（inversetransitioncycling, ITC），对表达的重组蛋白进行纯化。这种方法基于ELP在特定温度下发生相变的特性，可以有效地从细胞提取物中分离出目标蛋白。 4. 生物学活性检测：在细胞水平，通过提取小鼠的PBMCs（外周血单核细胞）并检测IL-10的表达，IL-10是一种抗炎细胞因子，其上调表明重组蛋白可能具有调节免疫反应的作用。在动物水平，将纯化的重组蛋白给予高脂饮食诱导的肥胖小鼠，观察其对肥胖及代谢紊乱的影响。 5. 结果与结论：实验结果显示，成功表达了分子量约为60kDa的重组蛋白，并通过ITC纯化得到了高纯度的Amuc_1100-ELP。该重组蛋白能够上调PBMCs中的IL-10表达，同时在肥胖小鼠模型中显示了改善代谢紊乱的能力。这证明了Amuc_1100-ELP的生物学活性。 这项研究成功地构建了一个用于Amuc_1100表达的原核表达载体，实现了其在大肠杆菌中的高效表达和纯化，并初步验证了其在细胞和动物模型中的活性。这些发现为Amuc_1100的进一步研究，比如在代谢性疾病治疗或药物开发中的潜在应用，提供了基础。