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PKCζ在 AngII 诱导的血管平滑肌细胞增殖肥大中的作用
赵亚莉， 刘洁， 李丽， 刘利梅， 吴立玲
*
（北京大学医学部生理学与病理生理学系 北京 100083）
* 责任作者，e-mail: pathophy@bjmu.edu.cn
摘 要: 目的：研究参与大鼠血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cell, VSMC）增殖肥
大的PKC亚型，进一步揭示VSMC增殖肥大的信号转导机制。方法：[
3
H]-TdR掺入法检测
VSMC增殖，[
3
H]-亮氨酸掺入法检测VSMC蛋白质合成，Western blot检测PKCζ的表达, 免
疫荧光观察PKCζ转位。结果：PKC非特异性抑制剂staurosporine可以使AngII引起的VSMC
[
3
H]-TdR掺入减少39.3%（P<0.01），[
3
H]-亮氨酸也明显减少（P<0.01）；非典型性PKCζ抑制
剂（pseudosubstrate inhibitor，PS-PKCζ）能明显抑制VSMC DNA合成和蛋白质合成(P<0.01
或P<0.05)，1 µmol/L PS-PKCζ和10 µmol/L PS-PKCζ可以使AngII引起的VSMC [
3
H]-TdR掺入
分别减少48%和80%，[
3
H]-亮氨酸掺入分别减少64%和100%。AngII刺激可使VSMC中PKC
磷酸化水平升高近一倍（P<0.01），并且发生膜转位。结论：AngII可以激活VSMC中非典型
性PKCζ亚型，PKCζ亚型参与了AngII诱导的VSMC增殖和肥大。
关键词: VSMC；增殖肥大；PKCζ
1 引言
血管紧张素 II(angiotensin II, AngII)可以通过多种信号转导通路诱导血管平滑肌细胞
（vascular smooth muscle cell, VSMC）增殖，PKC 是一个在多条信号转导通路的交互调节中
起关键作用的蛋白激酶
[1,2,3]
，参与气管平滑肌细胞
[4]
、成纤维细胞
[5]
等多种类型细胞的增殖，
但其在 VSMC 增殖肥大中的作用及其亚型尚不明确。尽管 AngII 和 PDGF 等因素诱导的
VSMC 增殖中都有 PKC 参与
[6
，
7
，
8]
，但也有研究认为 PKC 在 VSMC 增殖中不起作用
[9]
有学
者报道 PKCζ可以介导 AngII 诱导的 VSMS ERK 活化
[10]
。但 PKCζ否参与 VSMC 增殖肥大，
尚未见报道。本实验对 AngII 通过 PKC 途径激活诱导 VSMC 增殖肥大的机制进行研究，着
重探讨参与 VSMC 增殖肥大的 PKC 亚型，以进一步揭示 VSMC 增殖肥大的信号转导机制。
2 材料和方法
2.1 材料
健康雄性 SD 大鼠，体重 200-250g，由北京大学医学部试验动物中心提供。抗磷酸化
及非磷酸化 PKCζ的抗体，及 PKCζ假底物抑制剂（pseudosubstrate inhibitor，PS- PKCζ）
均购自 Santa Cruz 公司，化学发光剂购自 Amersham pharmacia biotech 公司，细胞培养试剂
及各种工具药购自 Sigma 公司，[
3
H]-TdR 和[
3
H]-亮氨酸购自中国科学院原子能研究所，其
它试剂均为分析纯产品。
2.2 VSMC 细胞培养及鉴定
取大鼠胸主动脉，采用消化法分离 VSMC，用含 10%胎牛血清的 DMEM 在 37℃、5%CO
2
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