构建高效TCTP-shRNA慢病毒载体实现基因沉默

本文主要探讨了TCTP-shRNA重组慢病毒载体的构建与鉴定，由张迎春、赵莎、李甘地和刘卫平等研究人员合作完成。研究的主要目标是通过设计和构建TCTP-shRNA干扰序列，创建一种能够有效下调靶细胞内源性TCTP（翻译控制肿瘤蛋白）表达的慢病毒载体。TCTP在多种生物学过程中扮演着关键角色，其过度表达与多种癌症的发生和发展有关，因此，抑制其功能具有潜在的抗癌治疗价值。 首先，研究者们采用了一系列分子生物学技术，包括酶切、连接、转化、载体提取、序列分析以及重组策略来构建TCTP过表达载体，具体选择了pEGFP-N1-3FLAG-TCTP-GFP作为模板。这种载体的设计允许将TCTP基因与绿色荧光蛋白(GFP)融合，便于观察和追踪病毒的感染情况。 接着，他们将构建的TCTP过表达载体和shRNA表达质粒共同转染到293T细胞中，通过RNA干扰筛选出对TCTP表达有显著抑制作用的候选质粒。这个过程涉及到细胞筛选、RNAi技术的应用，以及慢病毒的大量包装和浓缩，以确保病毒的有效传播和稳定的基因沉默效果。 研究结果显示，成功构建了四个TCTP RNAi表达质粒和一个过表达质粒，其中的一个干扰效果更佳。通过外源性筛选，他们获得了优化的TCTP-shRNA质粒，并将其包装成重组慢病毒。最终，浓缩后的重组慢病毒的滴度达到了3×108 TU/ml，这是一个较高的病毒载量，表明病毒的复制能力和感染效率良好。 该研究的重要意义在于，不仅证实了TCTP-shRNA重组慢病毒的构建可行性，还为后续的肿瘤研究提供了有效的工具，有望通过靶向TCTP沉默来调节肿瘤细胞的生长和转移，为癌症治疗开辟新的途径。此外，论文的发表在《中国科技论文在线》上，标志着这项研究成果的学术价值，且获得了高等学校博士学科点专项科研基金和国家自然科学基金的支持，体现了研究者在该领域的深入探索和贡献。