毕赤酵母表达重组人血清白蛋白-IL-2 C125A融合蛋白

"重组融合人血清白蛋白-人白介素-2 C125A突变体在毕赤酵母中的表达 (2010年)" 本文详细介绍了在毕赤酵母(Pichia pastoris GS115)中表达重组融合蛋白人血清白蛋白-人白介素-2 C125A突变体的研究过程。人血清白蛋白（HSA）是一种广泛应用于医药领域的蛋白质，而人白介素-2(IL-2)则是一种重要的免疫调节因子。C125A突变是IL-2分子中的一种特定氨基酸改变，这种突变体可能会影响IL-2的功能特性。 首先，研究者设计并合成了一个符合毕赤酵母密码子偏好的IL-2编码基因IL-2m，该基因包含了C125A突变。这一过程涉及到对IL-2基因序列的精确操作，以确保在毕赤酵母中能被正确翻译。接着，通过酶切连接技术，将IL-2m基因与HSA的编码基因连接，形成融合基因HSA-IL2m。这种融合策略旨在保持两者功能的同时，提高蛋白质的稳定性和生物活性。 融合基因HSA-IL2m随后被克隆到表达质粒pPIC9K中，这是一种常用的毕赤酵母表达载体。利用电击转化法，将含融合基因的质粒导入毕赤酵母GS115的感受态细胞，从而创建了重组的基因工程菌株P. pastoris GS115/pPHIm。在摇瓶发酵条件下，这种工程菌能够分泌表达目标融合蛋白。 实验结果显示，通过Western blot分析，该融合蛋白能够与IL-2和HSA的抗体发生免疫反应，证明了它既保留了IL-2的结构特性，又与HSA结合。进一步的生物活性测试表明，经过脱盐和冻干处理的粗提蛋白中，IL-2的生物学活性达到了1.51×10^6 IU/mg，这表明该融合蛋白具有高活性的人白介素-2功能。 这项研究成功地在毕赤酵母系统中实现了人血清白蛋白与C125A突变IL-2的融合表达，为后续的药物开发和治疗应用提供了新的可能。这种融合蛋白的高效表达和活性验证，对于理解IL-2的功能以及开发新型生物药物具有重要意义。