毕赤酵母表达重组人血清白蛋白-IL-2 C125A融合蛋白
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更新于2024-08-11
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"重组融合人血清白蛋白-人白介素-2 C125A突变体在毕赤酵母中的表达 (2010年)"
本文详细介绍了在毕赤酵母(Pichia pastoris GS115)中表达重组融合蛋白人血清白蛋白-人白介素-2 C125A突变体的研究过程。人血清白蛋白(HSA)是一种广泛应用于医药领域的蛋白质,而人白介素-2(IL-2)则是一种重要的免疫调节因子。C125A突变是IL-2分子中的一种特定氨基酸改变,这种突变体可能会影响IL-2的功能特性。
首先,研究者设计并合成了一个符合毕赤酵母密码子偏好的IL-2编码基因IL-2m,该基因包含了C125A突变。这一过程涉及到对IL-2基因序列的精确操作,以确保在毕赤酵母中能被正确翻译。接着,通过酶切连接技术,将IL-2m基因与HSA的编码基因连接,形成融合基因HSA-IL2m。这种融合策略旨在保持两者功能的同时,提高蛋白质的稳定性和生物活性。
融合基因HSA-IL2m随后被克隆到表达质粒pPIC9K中,这是一种常用的毕赤酵母表达载体。利用电击转化法,将含融合基因的质粒导入毕赤酵母GS115的感受态细胞,从而创建了重组的基因工程菌株P. pastoris GS115/pPHIm。在摇瓶发酵条件下,这种工程菌能够分泌表达目标融合蛋白。
实验结果显示,通过Western blot分析,该融合蛋白能够与IL-2和HSA的抗体发生免疫反应,证明了它既保留了IL-2的结构特性,又与HSA结合。进一步的生物活性测试表明,经过脱盐和冻干处理的粗提蛋白中,IL-2的生物学活性达到了1.51×10^6 IU/mg,这表明该融合蛋白具有高活性的人白介素-2功能。
这项研究成功地在毕赤酵母系统中实现了人血清白蛋白与C125A突变IL-2的融合表达,为后续的药物开发和治疗应用提供了新的可能。这种融合蛋白的高效表达和活性验证,对于理解IL-2的功能以及开发新型生物药物具有重要意义。
2021-02-22 上传
2021-05-16 上传
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