建鲤IL-1β和IL-8基因实时荧光定量PCR检测方法的构建与应用

本文主要介绍了在2014年由曾东、肖拉和倪学勤等人在《湖南农业大学学报(自然科学版)》上发表的研究论文，标题为"建鲤IL-1β和IL-8基因实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立"。研究的目的是开发一种高效、精确的基因检测技术，以测定建鲤（Cyprinus carpio var. Jian）中的IL-1β和IL-8基因表达。 首先，作者依据GenBank数据库中的基因序列，在基因保守区域设计了特异性引物。选择β-actin作为内参基因，这是因为在基因表达研究中，β-actin常常被用作稳定性和表达水平的参考基因。研究采用了SYBR Green I染料法，这是一种常用的实时荧光定量PCR技术，通过监测荧光信号的变化来追踪目标基因的扩增过程。 实验结果显示，三种基因的熔解曲线清晰，β-actin、IL-1β和IL-8的Tm值分别为86℃、82.5℃和84℃，这表明它们具有良好的特异性。标准曲线的Ct值范围为12~32，显示出良好的扩增效率，分别为96.3%、103.2%和102.6%，并且所有基因的r2值都大于0.990，表明线性关系良好。组内变异系数较低，证明了该方法的重复性和稳定性。 通过实际应用，作者检测了健康建鲤头部和肾脏组织中IL-1β和IL-8的相对表达量，结果分别为1.09和1.71，这验证了新建立的检测方法的有效性。这项研究建立了建鲤IL-1β和IL-8基因实时荧光定量RT-PCR方法，其特点是检测范围广泛、扩增效率高、特异性好和重复性高，对于鱼类免疫相关基因的表达研究具有重要的实用价值。 关键词包括：建鲤(Cyprinus carpio var. Jian)、IL-1β、IL-8、实时荧光定量RT-PCR，表明这项研究是在生物学领域，特别是鱼类分子生物学和免疫学研究中的一个重要贡献。论文的发表对后续鱼类疾病诊断、免疫力调控机制探究以及种质改良等方面的工作提供了有力的技术支持。