赭曲霉毒素A噬菌体单链抗体库的构建与鉴定技术

"赭曲霉毒素A噬菌体单链抗体库的构建与鉴定" 这篇论文主要探讨了赭曲霉毒素A(OTA)的噬菌体单链抗体(ScFv)库的构建与鉴定方法。赭曲霉毒素A是一种常见的真菌毒素，对人体和动物的健康构成威胁，尤其在食品和饲料中检测其存在至关重要。为了实现这一目标，研究人员通过免疫小鼠获取了针对OTA的特异性抗体基因。 首先，研究者从小鼠脾细胞中提取了针对OTA免疫反应的B细胞，利用聚合酶链式反应(PCR)扩增出编码抗体可变区的VH（重链可变区）和VL（轻链可变区）基因片段。这些基因片段随后通过重叠延伸PCR (SOE-PCR)技术进行拼接，形成一个单一的编码ScFv的基因。ScFv是由VH和VL基因片段连接而成的，它保留了完整抗体的结合能力，但结构更为紧凑，适于应用在各种生物技术中，如噬菌体展示技术。 接下来，将合成的ScFv基因插入到噬菌体表达载体pCANTAB5E中，这个过程称为克隆。克隆成功的基因片段被转入大肠杆菌TG1感受态细胞中，使得这些细胞能够表达并展示ScFv抗体。为了使抗体展示在噬菌体表面，研究团队引入了辅助噬菌体M13K07进行超感染，从而构建了OTA毒素的噬菌体抗体库。 构建完成的抗体库经过一系列的筛选步骤，包括免疫亲和筛选和富集，以找到能够特异性结合OTA的噬菌体抗体。最终，通过酶联免疫吸附测定(ELISA)筛选，研究者得到了5株能够分泌阳性噬菌体抗体的细菌，证明了该噬菌体ScFv库的成功构建。 这项工作为开发 OTA 的快速、灵敏的检测方法提供了基础，特别是在食品安全和畜牧业领域，有助于提高对这种真菌毒素的检测效率和准确性。同时，噬菌体展示技术的应用也展示了其在抗体制备和分子诊断中的潜力。通过这种方法，未来可以设计和优化更特异性的抗体用于毒素检测，进一步保障食品安全。