IL-24基因克隆与表达研究:诱导Hela细胞凋亡
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更新于2024-09-04
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"人白细胞介素24基因的克隆表达及诱导Hela细胞凋亡"
本文详细探讨了人白细胞介素24(IL-24)基因的克隆、表达以及其在诱导Hela细胞凋亡中的作用。IL-24是一种属于IL-10家族的细胞因子,最初因在黑色素瘤分化过程中高表达而被命名为MDA-7。IL-24因其独特的肿瘤抑制特性,能够抑制肿瘤生长并诱导细胞凋亡,成为癌症治疗研究的重要靶点。
研究人员褚凤娇和张耀洲采用分子生物学技术,首先通过PCR扩增得到了IL-24成熟肽的编码序列,然后将这个序列定向克隆到一个融合表达载体pET-28a(+)中。重组载体pET-28a-IL-24经过DNA测序验证,确保了序列的准确性。接下来,该重组质粒被转化入大肠杆菌E.coli BL21(DE3)中,通过IPTG诱导表达IL-24蛋白。表达的IL-24蛋白以约28kDa的分子量存在于包涵体形式,占菌体总蛋白的大约40%。
为了进一步纯化IL-24蛋白,研究人员利用6×His标签的亲和层析方法,成功地从包涵体中分离出了高纯度的融合蛋白6×His-IL-24。通过免疫新西兰雄性大白兔,产生的抗血清在ELISA检测中效价高达1:51200以上,表明了抗血清的高效性。在Western blotting实验中,6×His-IL-24能够特异性地与兔抗IL-24的多克隆抗血清结合,验证了其免疫识别的特异性。
功能性实验中,MTT法显示IL-24对癌细胞的抑制作用随时间的增加而增强,表明IL-24可能通过持续作用来有效抑制癌细胞的生长。此外,荧光染色实验观察到细胞出现膨胀和破碎等凋亡特征,进一步证实了IL-24诱导Hela细胞凋亡的能力。
这项研究成功构建了IL-24的融合表达载体,并在大肠杆菌中实现了高效表达和纯化。这些成果不仅为IL-24的功能和活性研究提供了基础,还展示了IL-24作为潜在抗肿瘤药物的可能性,特别是其对癌细胞生长的抑制作用和诱导凋亡的作用,为未来开发新的癌症治疗方法提供了理论依据。关键词涉及人IL-24、融合表达、纯化、MTT实验以及凋亡,这些都是该研究的核心内容。
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