优化表达与纯化GST-Whi2融合蛋白的方法

"Whi2蛋白的表达与纯化——张玉，蔡斌，滕昕辰" 本文主要介绍了Whi2蛋白的表达与纯化过程，由苏州大学药学院和苏州银河生物医药有限公司的研究团队完成。研究的主要目的是寻找提高Whi2蛋白产量的有效方法。 首先，研究者将WHI2基因片段插入了一个含有GST（谷胱甘肽S-转移酶）亲和标签的GH413质粒中。这个策略是利用GST标签来帮助后续的纯化步骤，因为GST可以与特定的琼脂糖凝胶结合，便于蛋白质的分离和纯化。然后，他们将重组质粒转化到大肠杆菌中，作为表达Whi2蛋白的宿主细胞。 在表达实验中，研究者在不同温度下诱导GST-Whi2融合蛋白的表达，并使用不同浓度的IPTG（异丙基-β-D-硫代半乳糖苷）作为诱导剂，以找出最优化的诱导条件。IPTG是一种常用的诱导剂，可以激活大肠杆菌中的乳糖操纵子，从而启动融合蛋白的表达。 为了提高蛋白的可溶性并降低包涵体的形成，研究者采用了Sarkosyl，这是一种阴离子去垢剂，可以帮助溶解包涵体并使目标蛋白保持可溶状态。经过这一处理，融合蛋白的可溶性显著提高。 接着，利用谷胱甘肽琼脂糖凝胶珠进行纯化。这种纯化方法基于GST标签与凝胶珠上的谷胱甘肽之间的亲和力，可以有效地从细菌提取物中分离出GST-Whi2融合蛋白。纯化后的蛋白样品通过SDS-PAGE（聚丙烯酰胺凝胶电泳）和考马斯亮蓝染色进行质量评估，以确认其纯度。 最后，通过凝血酶酶切，研究者成功地从GST-Whi2融合蛋白中释放出纯化的Whi2蛋白。这种方法通常用于去除GST标签，以便得到无标签的纯蛋白。结果显示，纯化后的Whi2蛋白产量达到了10mg/L菌液，表明实验达到了预期目标，即实现了高纯度、高产率的Whi2蛋白表达与纯化。 研究团队成功构建了一套GST-Whi2表达体系，确定了最佳诱导条件和纯化步骤，获得了高质量的Whi2蛋白。这些研究成果对于进一步研究Whi2蛋白的功能及其在生物学过程中的作用具有重要意义。关键词包括GST融合蛋白、Whi2蛋白以及蛋白表达纯化，表明该研究涉及了分子生物学和蛋白质科学的核心技术。