制备与鉴定牛IFN-γ单克隆抗体的研究

"抗牛IFN-γ单克隆抗体的制备与鉴定 (2009年)" 是一篇关于生物技术领域的论文，主要研究如何制造针对牛干扰素γ（IFN-γ）的单克隆抗体。这篇论文由刘思莹等人在2009年发表于《东北农业大学学报》。 在论文中，研究人员采用纯化的重组His标签的牛IFN-γ蛋白（rHis-BoIFN-γ）作为免疫原，对4至6周龄的BALB/c小鼠进行免疫接种。经过三次免疫后，他们提取小鼠的脾细胞并与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合，以创建杂交瘤细胞。这些杂交瘤细胞能够稳定地分泌特异性针对rBoIFN-γ的单克隆抗体。 为了筛选和鉴定这些抗体，研究人员使用了纯化的重组GST标签的牛IFN-γ（rGST-BoIFN-γ）作为检测抗原，通过间接ELISA（酶联免疫吸附测定）和有限稀释法。试验结果表明，成功获得了4株能稳定分泌抗rBoIFN-γ的单克隆抗体细胞株，且这些抗体都属于IgM亚类，轻链为κ链。 进一步的鉴定中，通过Western blot分析，4株单抗都能特异性地与rGST-BoIFN-γ蛋白结合，而不会与GST标签蛋白反应。这表明这些抗体具有高度的特异性。在间接ELISA测试中，这些单抗只与rBoIFN-γ反应，不与其他细胞因子如rGoIFN-α、rGoIFN-γ、rBoIFN-α等发生交叉反应，进一步确认了其特异性。 此外，通过间接免疫荧光实验，4株单抗都能与真核细胞BHK21表达的rBoIFN-γ产生强烈的荧光反应，这意味着它们能够识别接近天然状态的牛IFN-γ。最后，通过阻断ELISA检测，发现其中的3D10株单抗可以与牛外周血诱导产生的天然干扰素反应，证明了这种单抗在实际应用中的潜在价值。 这篇论文详细介绍了如何制备针对牛IFN-γ的特异性单克隆抗体，以及这些抗体的鉴定过程和特性，对于开发牛干扰素γ的检测方法和可能的临床应用具有重要意义。这些研究成果对于畜牧业的疾病监控、免疫调节研究以及生物治疗等领域具有重要贡献。