基因组重组法优化TEV蛋白酶高产表达

本文主要探讨了基于基因组的TEV蛋白酶的高表达技术，发表于2014年的《南京师大学报(自然科学版)》第37卷第3期。TEV蛋白酶作为一种具有广泛应用价值的酶，因其高效的酶切活性、高度特异性的酶切位点以及对反应条件的宽泛适应性，在蛋白质分离和蛋白质组学研究中扮演着关键角色。传统的获取方法是通过将TEV基因克隆到质粒并在大肠杆菌表达菌株BL21(DE3)中进行过表达。然而，这种方法存在一些局限性，例如依赖抗生素可能导致纯化过程中的杂质引入，以及菌株群体内部的不一致性可能影响产量。 研究人员针对这些问题，采用了一种创新的重组工程策略。他们将受T7强启动子驱动的TEV基因与麦芽糖结合蛋白MBP融合，然后将这一融合基因整合至BL21(DE3)的基因组中。这种策略的优势在于MBP-TEV能够在细胞内自我剪切，从而实现TEV蛋白的高效分离。通过Ni-NTA亲和层析技术，作者成功获得了高纯度的TEV蛋白，产量达到了每升4.2毫克，显示出良好的酶切活性。 这一研究不仅优化了TEV蛋白的生产过程，降低了外来杂质的影响，还展示了大规模生产TEV蛋白的潜力。同时，构建的将外源基因整合至BL21(DE3)基因组的通用表达平台技术，对于生物技术领域来说具有重要的实际应用价值和理论意义。这项工作对于提高蛋白质工程和蛋白质组学研究的实验效率，以及推动基因工程技术的发展具有重要意义。