构建杆状病毒展示系统：猪瘟病毒重组融合蛋白E2-2A-E0的表达与展示

"猪瘟病毒重组融合蛋白E2-2A-E0在家蚕杆状病毒表面的展示" 这篇科研论文详细介绍了研究人员如何构建一种创新的疫苗研制策略，即在杆状病毒表面展示猪瘟病毒的重组融合蛋白E2-2A-E0。这项工作是由张学赛、单茜茜等人进行的，他们利用了先进的分子生物学技术，如SOE-PCR（拼接介导的重叠延伸聚合酶链式反应）、PCR（聚合酶链式反应）和双酶切技术，成功构建了杆状病毒表面展示系统的转移载体pFastBac1-gp64。 这个转移载体是构建新型猪瘟疫苗的关键，因为它允许目标蛋白E2-2A-E0在细胞和杆状病毒的囊膜表面表达。首先，研究者构建了大肠杆菌重组表达质粒pET-28a-E2-2A-E0，该质粒在E.coli Rosetta菌株中表达了融合蛋白，并通过包涵体洗涤和镍离子亲和层析进行纯化。纯化的蛋白质随后被用来制备多克隆抗体，抗体效价高达1:51200，证明了抗原的有效性。 接下来，研究人员构建了重组转移载体pFastBac1-gp64-E2-2A-E0，借助Bac-to-Bac系统获得了重组杆状病毒Bmgp64-E2-2A-E0。通过SDS-PAGE（聚丙烯酰胺凝胶电泳）、Western blotting（西方印迹）鉴定以及激光共聚焦显微镜观察，确认了重组融合蛋白在家蚕BmN细胞、五龄幼虫和蛹中表达，并成功展示在细胞和病毒囊膜表面。 这些结果显示，这种展示系统为研究重组杆状病毒的免疫原性以及开发新型猪瘟疫苗提供了有效的工具。关键词包括生物化学与分子生物学、CSFV（猪瘟病毒）、家蚕杆状病毒表面展示系统以及猪瘟疫苗。该研究是在国家863项目（编号：2011AA100603）和国家863计划课题（No.2007AA021703）的支持下进行的，由浙江理工大学生命科学学院生物化学研究所和浙江省家蚕生物反应器和生物医药重点实验室共同完成。通信联系人为张耀洲教授，他的主要研究方向是家蚕生物反应器。