CASP8基因多态与T细胞淋巴瘤易感性：一项遗传变异与蛋白表达的深度分析

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凋亡通路分子标志在T细胞淋巴瘤中的遗传变异和蛋白表达——易感性研究和临床资料分析，由杨晟和石远凯两位作者在中国协和医科大学中国医学科学院肿瘤医院肿瘤研究所进行，主要关注的是凋亡相关半胱氨酸蛋白酶8 (CASP8) 基因多态性与T细胞淋巴瘤易感性的关联。研究通过PCR-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP) 方法对92例T细胞淋巴瘤患者和301例正常对照者的CASP8基因启动子区-652AGTAAG插入/缺失(-6526Nins/del, rs3834129) 进行了深入分析。研究发现，携带CASP8-6526Nins/del基因型的个体相较于携带CASP8-6526Nins/ins基因型，T细胞淋巴瘤的患病风险显著增加，OR值为1.93(95%CI 1.13-3.31)，这意味着携带缺失/杂合突变的个体更易发展为该疾病。而携带-6526Ndel/del基因型的个体罹患T细胞淋巴瘤的风险更高，OR值达到7.42(95%CI 3.13-17.62)，显示出明显的等位基因剂量效应。研究结果显示，CASP8-6526Nins/del等位基因在T细胞淋巴瘤患者中频率显著高于正常对照，这提示了该基因变异可能与T细胞淋巴瘤的易感性有关。值得注意的是，尽管B细胞淋巴瘤更为常见，但该研究同样分析了168例B细胞淋巴瘤和501例正常人的CASP8-6526Nins/del基因多态与患病风险，结果显示两者之间并无显著差异，暗示CASP8基因变异对B细胞淋巴瘤的影响可能不明显。这项研究的意义在于，它提供了关于CASP8基因多态性在T细胞淋巴瘤发生中的潜在作用的新见解，有助于理解疾病的遗传基础，为未来制定个性化的预防策略和治疗方案提供科学依据。同时，它提醒临床医生关注此类遗传变异，以便早期识别和干预高风险人群，从而改善T细胞淋巴瘤患者的预后。

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2.2 基因组 DNA 的制备

2.2.1 外周血和骨髓标本 DNA 的提取

将未经抗凝处理的血凝块或分离的淋巴细胞、骨髓细胞捣成匀浆，利用酚-氯仿抽提法

进行提取，于 –20°C 保存。

2.2.2 石蜡包埋组织 DNA 的提取

刮取肿瘤组织；将刮取的带蜡屑的组织，小心移入盛有二甲苯溶液的离心管中，室温过

夜；离心，弃去上清，再加入二甲苯混匀离心次；弃上清，依次加入不同浓度的乙醇离心，

加入双蒸水离心，弃上清；沉淀物室温下干燥；加入消化缓冲液，离心，吸取上清，装入另

一清洁的 1.5ml 离心管中，-20℃保存。

2.2.3 CASP8 基因型分析

CASP8 基因型分析采用 PCR-限制性片段长度多态（PCR-RFLP）分析方法。6N ins 等

位基因所在的 DNA 序列存在一个限制性内切酶 XspI 位点，因此两种不同等位基因 PCR

产物经 XspI 酶切后，可通过琼脂糖凝胶电泳观察限制性片段长度分析基因型。

2.2.4 PCR 扩增引物

CASP8 L: 5’-CTG CAT GCC AGG AGC TAA GT-3’，

CASP8 R: 5’-GCC ATA GTA ATT CTT GCT CTG C-3’。

2.2.5 PCR 反应条件

血标本和骨髓标本 DNA 的反应条件为 95°C 预变性 2 min，然后 94°C 30 s，58°C 30 s 和

72°C 30 s，进行 35 个循环后 72°C 延伸 7 min。

石蜡包埋组织标本 DNA 的退火温度取 59℃，其余条件同血标本和骨髓标本 DNA 相同。

2.2.6 酶切

取 8 µl PCR 产物与 0.25 U XspI 在 37°C 温育 4 h，酶切产物在 3%琼脂糖凝胶上电泳分

析。

2.3 统计学分析

以χ

检验比较病例组和对照组之间的性别、吸烟状况、累积吸烟量以及各基因型和单体

型分布的差异。以非条件性logistic回归模型计算的比值比（odds ratio, OR）及其95%可信区

间（ confidence interval, CI）表示基因型与各种肿瘤发生的相对风险度。对OR 值进行混杂因

素如年龄、性别、吸烟和饮酒校正。统计学分析用Statistic Analysis System 8.0 版（SAS Institute,

Cary, NC, USA）进行。P<0.05时认为差异有统计学意义。

3. 结果

3.1 研究对象的基本资料

本研究包括 T 细胞淋巴瘤患者 92 例，其中 49 例(55.1%)采用外周血标本，38 例(42.7%)

采用石蜡包埋组织标本，另 2 例(2.2%)采用骨髓标本。正常人对照 802 例，其中 301 例用于

T 细胞淋巴瘤的对照，501 例用作 B 细胞淋巴瘤的对照。

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