TAT-Oct4融合蛋白的高效表达与细胞膜穿透研究：细胞重编程新途径

本篇文章标题为《细胞穿膜肽TAT与小鼠干细胞转录因子Oct4融合表达及纯化》（2013年），作者为王军、雷槌勇、陈蕴和全坚，发表在医药科学领域。研究的核心内容是构建了一个工程技术手段，利用TAT（Trans-Activator of Transcription）——一种已知的能穿透细胞膜的肽，与Oct4——在干细胞命运决定中起关键作用的转录因子，融合构建了重组蛋白pET28a-TAT-Oct4。 首先，研究者们通过将TAT-Oct4目的基因插入到pET28a表达载体中，成功地创建了大肠杆菌的重组表达体系。这种融合蛋白在大肠杆菌中的主要表达形式是非溶性的包涵体，这是蛋白质表达过程中常见的一种现象，表示部分未折叠的蛋白质被包裹在细胞内。 经过后续的纯化步骤，表达产物的纯度得到了显著提升，达到了90%以上，这表明了实验的成功并确保了得到的TAT-Oct4融合蛋白具有较高的质量和活性。纯化过程中的尿素梯度透析被用来复性这些非活性蛋白，结果显示平均复性收率约为8.8%，这是一个衡量蛋白质复性效率的重要指标。 细胞免疫荧光技术的应用对TAT-Oct4融合蛋白的特性进行了深入研究，结果显示它能够有效地穿透接近100%的细胞膜，这显示出其强大的穿膜能力。进人细胞后，融合蛋白主要分布在细胞核内，这可能是因为Oct4通常在核内发挥作用，这一发现对于理解TAT如何增强Oct4的功能具有重要意义。 这项研究的成果为细胞重编程提供了有效的研究材料，细胞重编程是指将成熟细胞转化为具有干细胞特性的细胞，这对于再生医学和组织工程等领域具有重大价值。此外，研究还为设计其他用于细胞重编程的干细胞转录因子提供了实用的方法学指导，这对于未来的科学研究和临床应用具有深远的影响。 该论文不仅展示了TAT-Oct4融合蛋白的制备和纯化技术，而且探讨了其生物学功能和潜在的应用前景，为干细胞研究领域的发展做出了贡献。