建立与分析稳定表达PTEN、EGFR、EGFRvⅢ胶质瘤细胞系

"稳定表达PTEN、EGFR、EGFRvⅢ人恶性胶质瘤细胞系的建立及其分析鉴定" 本文介绍了董裕翠和任欢等人建立稳定表达PTEN、EGFR、EGFRvⅢ人恶性胶质瘤细胞系的研究成果。这项研究的目的是通过基因、蛋白和细胞水平的验证，探讨外源性PTEN、EGFR和EGFRvⅢ基因对恶性胶质瘤细胞系U87MG的影响。 研究方法包括PCR技术扩增PTEN基因编码区序列，构建了重组表达载体pcDNA3.1(-)/PTEN。接着，将这个载体以及pLWERNL转染到U87MG细胞中，筛选出稳定表达的细胞系。通过RT-PCR（逆转录聚合酶链反应）和Western blotting（蛋白质印迹）技术，研究人员检测了PTEN和EGFR在不同抗性细胞克隆中的表达。此外，MTT（3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐）法用于评估这些外源性基因对细胞增殖的影响。 实验结果显示，成功构建了pcDNA3.1(-)/PTEN真核表达载体并建立了U87MG-PTEN和U87MG-EGFR稳定细胞系。RT-PCR和western blotting的验证证实了PTEN和EGFR的表达。转染外源性PTEN基因可以抑制细胞增殖，而转染EGFRvⅢ则促进了细胞增殖，而转染EGFR对细胞增殖无显著影响。 研究的结论是，他们成功建立了稳定表达PTEN（一种抑癌基因）、EGFR（表皮生长因子受体）及其突变型EGFRvⅢ的恶性胶质瘤细胞系。这为深入研究这些基因如何影响相关的细胞信号转导通路以及它们在恶性胶质瘤发生和发展中的作用提供了实验基础。 关键词：恶性胶质瘤；PTEN基因；EGFR基因；EGFRvⅢ基因；稳定转染 这个研究对于理解恶性胶质瘤的分子机制，特别是PTEN、EGFR和EGFRvⅢ在肿瘤发生中的作用，以及未来开发靶向治疗方法具有重要意义。通过构建这样的细胞系，科学家们能够更深入地探究这些基因如何影响细胞增殖，从而可能发现新的治疗策略。