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镇江香醋醋醅中产酸菌的分子鉴定
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朱其瀚
2
,许伟
2
,窦文芳
1
,许泓渝
1
,许正宏
1,2*
1 江南大学医药学院制药工程研究室,江苏无锡 (214122)
2 江南大学工业生物技术教育部重点实验室,江苏无锡 (214122)
E-mail:Zhuqihan2006@163.com
摘 要:以镇江恒顺醋厂醋醅为实验样品,分离纯化得到 5 株产酸细菌,再以细菌通用引物
P0 和 P6 扩增其 16S rDNA 全长序列,经测序鉴定其分别属于 Staphylococcus sp.、Paenibacillus
sp.、Lactobacillus paracasei、Acetobacter pasteurianus 和 Bacillus ruris。
关键词:醋;产酸菌;16S rDNA;鉴定
目前,国内外对于食醋酿造行业的研究主要集中于:醋酸菌的分离
[1]
、生理生化和分子
生物学快速鉴定
[1,2,3]
、醋酸菌的分类学研究
[4]
,优良醋酸菌的选育
[1,5]
,食醋酿造工艺的改进
[6]
,新品醋(主要是保健醋和果醋)的研制开发
[7,8]
,食醋中功能因子的研究
[9]
。但是对于功
能性微生物在食醋酿造过程中的作用还缺乏全面深入的了解,关于这方面的文献报道也不多
[10,11,12]
。
镇江香醋总酸很高(平均约6.82%),但并无刺激感,酸味柔和。已有研究表明有机酸起
着非常重要的作用
[10,11]
。有机酸是镇江香醋中的主要风味物质之一,其种类、含量及其相互
比例与产品质量和风味密切相关,所以研究镇江香醋中产酸菌的分布有着重要意义。本研究
仅以镇江恒顺醋厂醋酸发酵旺盛的醋醅为实验材料,考察食醋酿造过程中产酸菌的多样性,
从而为进一步揭示镇江香醋所独有的酿造微生物的分布及其功能奠定一定的理论基础。
1. 材料与方法
1.1 样品及试剂
1.1.1 样品采集
镇江恒顺香醋厂醋酸发酵旺盛时期(10d)的醋醅。
1.1.2 培养基
分离和斜面保藏培养基(GYC):酵母粉1%,葡萄糖1%,碳酸钙0.5%,琼脂2%,121℃灭
菌20min后冷却至50℃加入无水乙醇3%(v/v)。
1.1.3 菌株和质粒
大肠杆菌(Escherichia coli)JM109为本实验保存,质粒载体pMD19-T购自Takara公司。
1.1.4 主要试剂及仪器
扩增及克隆所用试剂均购自Takara公司,PCR产物回收试剂盒、质粒提取试剂盒购自上
海捷瑞生物工程有限公司,PCR仪(杭州朗基科学仪器有限公司),Agillent 1100高效液相色
谱质谱仪(美国安捷伦公司)。除特别注明外,实验用其他各种试剂均为国产分析纯。
1.2 方法
1.2.1 分离方法[1,5]
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本课题得到国家自然科学基金资助项目(No. 30600013)、国家科技支撑计划(No. 2006BAD27B09-3 )、教育
部新世纪优秀人才支持计划(No. NCET-07-0380) 的资助。