IRE1激酶抑制剂高通量筛选模型的构建与优化

"肌醇需求酶1(IREl)激酶抑制剂的高通量筛选模型的建立是本文的核心内容。研究者通过昆虫蛋白表达体系成功表达了内质网单次跨膜蛋白IREl的细胞质区域，并利用均相时间分辨荧光(HTRF)技术构建了激酶活性检测体系，旨在优化IREl激酶抑制剂的筛选过程。建立的模型具有良好的筛选效率，Z'因子达到0.58，CV值为7.5%，这些数值表明该模型满足高通量筛选的标准，为后续发现和研究IREl激酶抑制剂提供了可靠的基础。" 在生物化学和药物研发领域，IREl是一种重要的内质网单次跨膜蛋白，它在细胞应激反应和信号转导中起着关键作用。IREl激酶抑制剂的研究对理解细胞内稳态的调控机制，以及可能的疾病治疗具有重要意义。本研究中，采用昆虫蛋白表达系统表达并纯化IREl的细胞质片段，这种方法因其高效性和蛋白保持活性的优势而被广泛应用于蛋白质研究。 高通量筛选(HTS)是现代药物发现的关键步骤，它能快速测试大量化合物对目标分子（如IREl激酶）的抑制效果。HTRF技术是一种非放射性、高灵敏度的检测方法，通过测量荧光信号的时间差来确定分子间的相互作用。在本研究中，通过HTRF建立的激酶活性检测体系，可以精确评估潜在抑制剂对IREl激酶活性的影响，从而筛选出具有潜力的药物候选物。 Z'因子是衡量筛选实验重复性和可靠性的指标，其值在0到1之间，0.5以上的Z'因子被认为是适合高通量筛选的。CV值（变异系数）则反映了数据的分散程度，7.5%的CV值表明实验结果具有较好的一致性。这两个参数的优良表现，证明了所建立的高通量筛选模型的有效性和稳定性。 这项研究的成功为开发新的IREl激酶抑制剂开辟了道路，这些抑制剂可能对治疗与IREl功能异常相关的疾病（如内质网应激反应过度或失调导致的疾病）有潜在的治疗价值。此外，该研究的方法和模型也为其他激酶抑制剂的筛选提供了借鉴，对整个药物研发领域具有积极的推动作用。