Gateway技术用户手册：DNA序列克隆与表达

"Gateway系统用户手册" 本用户手册详细介绍了Gateway技术及其相关操作流程，旨在帮助研究者有效地利用这一通用DNA克隆技术进行功能分析和在多种系统中的表达。该技术结合了Clonase® II酶，能够实现DNA序列的无限制重组。 Gateway® Technology是一种广泛使用的克隆工具，其核心在于BP（Bacterial Phage）和LR（Ligation Reaction）重组反应。BP重组反应用于创建入口克隆，而LR重组反应则用于将入口克隆转移到目的地载体，以实现目标基因在不同表达系统的表达。 BP和LR重组反应协议对于有经验的用户至关重要。BP反应涉及将目的DNA片段（通过设计的attB PCR引物并进行PCR扩增得到的attB-PCR产品）与Gateway®入门载体进行重组，以生成入口克隆。这一过程包括PCR产物的纯化、BP重组反应的执行以及转化感受态细胞等步骤。入口克隆需通过测序验证，以确保正确性。 LR重组反应则用于将入口克隆转移到目的地载体，构建表达克隆。在这个过程中，LR重组酶将入口克隆的DNA片段转移到适合特定表达系统的Gateway®目的地载体中。构建目的地载体可能需要根据不同的表达需求进行定制。 手册还涵盖了Gateway®向量的特点，如它们的命名规则，以及创建入口克隆的不同选项和策略。此外，还提供了故障排查指南，以帮助用户解决实验中可能出现的问题。 总体而言，这份用户手册是理解、应用和优化Gateway®克隆技术的宝贵资源，适用于在生物科研领域进行基因功能研究和表达分析的专业人员。通过遵循手册中的详细步骤和建议，研究者可以更高效地利用这一技术，推进其在分子生物学和生物技术领域的研究工作。