Gateway技术用户手册:DNA序列克隆与表达
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更新于2024-07-22
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"Gateway系统用户手册"
本用户手册详细介绍了Gateway技术及其相关操作流程,旨在帮助研究者有效地利用这一通用DNA克隆技术进行功能分析和在多种系统中的表达。该技术结合了Clonase® II酶,能够实现DNA序列的无限制重组。
Gateway® Technology是一种广泛使用的克隆工具,其核心在于BP(Bacterial Phage)和LR(Ligation Reaction)重组反应。BP重组反应用于创建入口克隆,而LR重组反应则用于将入口克隆转移到目的地载体,以实现目标基因在不同表达系统的表达。
BP和LR重组反应协议对于有经验的用户至关重要。BP反应涉及将目的DNA片段(通过设计的attB PCR引物并进行PCR扩增得到的attB-PCR产品)与Gateway®入门载体进行重组,以生成入口克隆。这一过程包括PCR产物的纯化、BP重组反应的执行以及转化感受态细胞等步骤。入口克隆需通过测序验证,以确保正确性。
LR重组反应则用于将入口克隆转移到目的地载体,构建表达克隆。在这个过程中,LR重组酶将入口克隆的DNA片段转移到适合特定表达系统的Gateway®目的地载体中。构建目的地载体可能需要根据不同的表达需求进行定制。
手册还涵盖了Gateway®向量的特点,如它们的命名规则,以及创建入口克隆的不同选项和策略。此外,还提供了故障排查指南,以帮助用户解决实验中可能出现的问题。
总体而言,这份用户手册是理解、应用和优化Gateway®克隆技术的宝贵资源,适用于在生物科研领域进行基因功能研究和表达分析的专业人员。通过遵循手册中的详细步骤和建议,研究者可以更高效地利用这一技术,推进其在分子生物学和生物技术领域的研究工作。
2022-08-24 上传
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