大肠杆菌中GST-hEGF融合蛋白的表达与活性研究

"这篇论文是关于在大肠杆菌中实现谷胱甘肽硫转移酶（GST）与人表皮生长因子（hEGF）的融合表达，并对其活性进行研究的一篇科研文章。" 在这项研究中，科学家们旨在获得具有生物活性的人表皮生长因子（hEGF）。他们采用了基因工程的方法，将hEGF基因插入到原核表达载体pGEX-4t-1中，形成了一个GST-hEGF融合蛋白。这个构建随后被转化到一种特殊的大肠杆菌株——BL21 CodonPlusTM-RP中进行表达。这种表达宿主菌被选择是因为它能够提高异源蛋白的表达效率和正确折叠的可能性。 实验结果显示，融合蛋白主要以包涵体的形式积累在大肠杆菌细胞内。包涵体是一种蛋白质在非正常条件下形成的大型蛋白质聚合物，通常需要经过复性处理才能恢复其功能。研究人员使用了氧化复性技术，通过添加还原型谷胱甘肽（GSH）来帮助融合蛋白从包涵体状态恢复其天然结构。复性后的融合蛋白进一步通过Glutathione SepharoseTM4B亲和层析柱进行纯化，这是一种基于谷胱甘肽结合特性进行蛋白质分离的方法。 通过 Western blotting 技术，研究人员利用兔抗人EGF的单克隆抗体作为探针，验证了纯化得到的融合蛋白中确实包含了目标蛋白hEGF。这表明重组的GST-hEGF融合蛋白成功地表达并包含了hEGF的功能区域。 最后，对复性后的融合蛋白进行了生物学活性分析，结果显示该融合蛋白具有良好的hEGF生物学活性。这意味着，尽管是在大肠杆菌中表达并经过一系列处理，但融合蛋白仍能保留并表现出与天然hEGF相似的生物功能，这对于hEGF的科学研究和潜在的医药应用具有重要意义。 这篇论文的贡献在于展示了如何在原核系统中高效表达并复性纯化具有活性的hEGF，为今后类似蛋白质的研究和生产提供了参考方法。同时，其结果也证实了在生物技术领域，通过融合表达和蛋白质工程可以有效地生产具有生物学活性的复杂蛋白质。