KSHV vFLIP基因在血管内皮细胞中的功能研究

"KSHV vFLIP蛋白在血管内皮细胞中的表达及其功能验证" 本文研究的核心是卡波氏肉瘤病毒（Kaposi's sarcoma-associated herpesvirus, KSHV）编码的一种名为vFLIP（viral FLICE inhibitory protein）的蛋白质在血管内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells, HUVECs）中的表达及功能。vFLIP是一种由病毒诱导的，能够抑制细胞凋亡的蛋白，它在多种病毒感染过程中发挥关键作用，尤其是与某些肿瘤的发生发展密切相关。 基金项目支持下，研究人员构建了一个含有vFLIP基因的重组慢病毒表达载体（pHAGE-vFLIP）。慢病毒是一种能够整合其基因组到宿主细胞染色体上的病毒，常用于稳定转导各种细胞类型，包括内皮细胞。利用脂质体介导的共转染技术，将重组质粒与包装质粒psPAX2和包膜质粒pMD2.G一起转染293T细胞，生成慢病毒悬液。通过测定病毒滴度，确定了适宜的感染剂量（MOI）来感染HUVECs。 实验结果显示，成功表达了vFLIP蛋白的HUVECs可以通过蛋白质印迹法检测到。通过绿色荧光蛋白（GFP）流式分选，筛选出稳定表达vFLIP的细胞株。进一步的功能验证显示，这些细胞中vFLIP蛋白能够活化NF-κB（nuclear factor kappa B）信号通路，这是细胞内一个重要的转录因子家族，参与免疫响应、炎症反应和细胞生存等过程。 具体来说，vFLIP通过抑制IκBα（NF-κB抑制蛋白α）的降解，阻止NF-κB亚基p65进入细胞核，从而激活经典NF-κB信号通路。这种激活表明vFLIP可能在KSHV感染的血管内皮细胞中起到促进细胞增殖、抑制凋亡和促进炎症的作用，这可能是KSHV引发卡波氏肉瘤和其他相关疾病的重要机制。 这项研究成功地构建了稳定表达vFLIP的HUVECs模型，并揭示了vFLIP在内皮细胞中活化NF-κB信号通路的机制，为理解KSHV致病性和寻找潜在治疗靶点提供了重要的实验依据。未来的研究可以进一步探究vFLIP如何精细调控NF-κB通路，以及这一过程在病毒感染和肿瘤发生中的具体作用。