灰盖鬼伞菌漆酶Lcc9调控序列研究：定位与功能分析

"参与灰盖鬼伞菌漆酶Lcc9表达的调控序列定位" 这篇论文探讨了灰盖鬼伞菌（Coprinopsis cinerea）漆酶Lcc9表达的调控机制，特别是关注了该酶基因上游的调控序列。研究人员发现球托霉菌（Gongronella sp. W5）能够特异性地诱导灰盖鬼伞菌的Lcc9漆酶表达上调。在已有的文献中，这些存在于漆酶基因上游的序列被证实是基因表达调控的关键因素。 为了深入研究这些调控序列，研究团队采用了潮霉素作为筛选标记，并利用绿色荧光蛋白（GFP）作为报告基因。他们构建了一系列含有不同长度（200-1000 bp）的C.cinerea漆酶基因lcc9上游调控区序列作为启动子的GFP表达框。通过转化实验，成功获得了72株阳性转化株，随后通过Southern blotting技术，筛选出含有单拷贝gfp基因和不同长度启动子序列的阳性菌株各一株。 接着，研究人员将野生型菌株与5株阳性菌株进行共培养发酵，然后提取菌丝体细胞进行定量实时PCR（qRT-PCR）检测，以分析gfp转录水平。结果显示，转化株cc1000-1的gfp转录水平最高，这表明lcc9基因上游800-1000bp区域可能包含一个关键的调控序列，参与了Lcc9表达的上调。 这一研究结果为后续对C.cinerea漆酶lcc9顺式作用元件的深入探究提供了基础，对于理解漆酶基因表达调控的分子机制以及在生物工程和环境修复中的应用具有重要意义。关键词包括：分子生物学、真菌漆酶、灰盖鬼伞菌、共培养和调控序列。