香石竹斑驳病毒外壳蛋白原核表达与抗血清制备研究

本研究聚焦于香石竹斑驳病毒(Carnation mosaic virus, CarMV)，这是一种主要感染香石竹的病毒。研究者在已鉴定的CarMV毒源植物中提取了总RNA，随后通过分子生物学手段克隆了外壳蛋白基因（coat protein, cp）并构建了pET30a-CP重组质粒。这个质粒被导入大肠杆菌BL21(DE3)pLysS进行原核表达。 优化表达条件是研究的核心环节。通过实验调整，发现将目的蛋白的诱导表达安排在37℃环境下，当IPTG（异丙基硫代半乳糖苷，一种诱导剂）的终浓度设定为1.0毫摩尔/升时，6小时后可以获得最高的表达量。这里体现了对微生物培养条件的精细调控对于蛋白质表达效率的重要性。 蛋白纯化采用的是凝胶切割法，这一步确保了目标cp蛋白的高质量纯度。通过将纯化的cp蛋白注入小鼠体内，成功获得了特异性的抗血清，即能够识别并结合特定病毒蛋白的抗体。 Western-blot技术的应用验证了抗血清的有效性，它不仅与重组蛋白有特异性结合，还能与香石竹感染样本中的病毒cp蛋白反应。 进一步地，研究者利用制备的抗血清对昆明地区48个香石竹样品进行了抽样检测，结果显示79.2%的样本携带病毒，这揭示了CarMV在香石竹种群中的广泛分布。本研究的成果对于大规模抗血清生产、病毒检测以及深入理解cp基因与宿主植物之间的相互作用具有重要意义，为防治香石竹斑驳病提供了科学依据和技术支撑。 这项研究不仅展示了原核表达技术在病毒研究中的应用，还强调了抗血清的制备和检测在病毒病防控中的关键作用。同时，它也为今后针对其他植物病毒的研究提供了宝贵的实验经验和参考。