LiCALiSA方法学开发与实验指南

"博阳生物科技（上海）有限公司的方法学开发指导文档，主要涉及LiCALiSA测试方法的开发流程，包括测试原理、抗体配对、生物素化、发光微粒连接、测试条件优化以及样品测定等关键步骤。文档还提到了实验操作中的注意事项，如光敏感性的处理、孵育条件、微孔板的覆盖以及试剂的储存要求。" 本文档详细介绍了LiCALiSA测试方法的开发过程，这对于理解并实施基于生物标记技术的检测至关重要。首先，文档阐述了开始之前需要准备的试剂，如不同规格的链霉亲和素感光微粒（DonorBead）和发光微粒（AcceptorBead），以及使用这些试剂时的注意事项，例如避光存储和防止蒸发。 在测试原理部分，虽然未提供具体细节，但通常LiCALiSA测试基于双抗体夹心法，利用生物素-亲和素系统的高亲和力，结合发光微粒来检测样本中的目标分析物。测试项目开发涉及以下几个关键步骤： 1. 抗体配对：选择能特异性识别目标分析物的抗体，形成捕获抗体和检测抗体的组合。 2. 抗体生物素化：通过生物素化技术将生物素连接到抗体上，以增强与亲和素微粒的结合能力。 3. 抗体连接：将抗体连接到LiCALiSA的发光微粒上，形成检测体系的基础。 4. 最佳抗体对的确定：通过实验评估不同抗体组合的效果，找出最佳的结合效率和信号比。 5. 测试缓冲液的优化：调整缓冲液的成分和pH值，以获得最佳的抗体结合和信号稳定性。 6. 测试量、孵育时间和加样顺序的优化：这些参数的优化可以提高检测的灵敏度和特异性。 7. 定标曲线的建立：通过测定已知浓度的分析物，建立曲线以计算未知样品中的分析物水平。 此外，文档提供了附录，包括LiCALiSA测试项目开发步骤的总结和血清样品的准备指南，确保实验者能遵循标准流程进行操作。 整个开发过程中，光敏感性的处理尤为重要，因为链霉亲和素感光微粒对光有很高的敏感性，需在暗弱环境下操作。同时，考虑到测试中使用的液体量较少，使用粘性封膜可以防止蒸发。最后，所有试剂的储存和使用都需要遵循特定的温度和光保护条件，以保证测试的准确性和重复性。 这个方法学开发指导对于实验室研究人员、生物技术工程师和诊断开发人员来说是一份宝贵的参考资料，可以帮助他们理解和执行基于LiCALiSA技术的定量检测。