2007年sHLA-G1重组蛋白的原核表达与高纯度纯化策略
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更新于2024-08-07
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本文档探讨了"重组蛋白sHLA-G1的原核表达与纯化"这一主题,发表于2007年的《西北农林科技大学学报(自然科学版)》第35卷第8期。研究目的是在蛋白质层面深入理解人白细胞抗原HLA-G的功能特性。作者利用先前构建的克隆质粒pGEM-T-HLA-G1,构建了新的重组原核表达质粒pET28a-sHLA-G1。通过SDS-PAGE(聚丙烯酰胺凝胶电泳)技术,研究人员观察到sHLA-G1在大肠杆菌(Escherichia coli)中实现了稳定表达,然而,这种表达形式主要以包涵体的形式出现。
包涵体是一种在蛋白质合成过程中形成的不溶性聚合物,对于许多外源蛋白来说,它们是表达的一种常见现象。为了纯化这些重组蛋白,包涵体经过充分洗涤和尿素处理来溶解,然后采用钴离子树脂进行进一步纯化。这种方法成功地将蛋白质纯度提升到了90%以上,表明了高纯度的sHLA-G1蛋白的获得。
作者还进行了Western印迹分析,这是一种蛋白质检测技术,通过与HLA-G的特异性抗体87G进行反应,确认了重组蛋白的有效性和特异性。这个结果为后续的生物学活性研究以及可能的药物开发提供了关键的基础数据,因为HLA-G在免疫系统中扮演着重要的角色,特别是在胎盘发育和免疫耐受方面。
本研究的关键词包括HLA-G、原核表达、重组蛋白和包涵体,这些关键词揭示了研究的核心内容和方法。通过将HLA-G的基因转移到大肠杆菌中,科学家们得以在工业规模上生产这种蛋白质,这对于研究其生物学功能和潜在应用具有重要意义。这项研究为深入了解HLA-G的功能以及将其应用于临床或基础科研提供了重要的实验步骤和技术支持。
2024-09-26 上传
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