Rainbow与UV微球质控及Diva软件操作教程

"该文档是关于使用Rainbow和UV beads进行质控（QC）以及Diva软件操作的实践教程，适用于三根激光的流式细胞仪。内容包括样本准备、实验设计、仪器配置、参数设置及数据获取模板的创建。" 在流式细胞术中，质控是一个至关重要的步骤，它能确保仪器性能稳定，结果可靠。Rainbow荧光微球和UV荧光微球被用作标准工具来检查不同激光波长（488nm蓝光、633nm红光和407nm紫光）下的性能。Rainbow微球含有不同浓度的荧光团，可用于评估不同激发波长下的光强度和分辨率，而UV微球则专门用于407nm激光的检测。 首先，样本制备需谨慎，确保Rainbow微球和UV微球混合均匀，并在鞘液中按比例加入，之后充分混匀。实验设计时，应在"浏览器"中创建相应的文件夹结构，包括QC、实验组、样本日期和采集管，同时重命名以保持组织有序。通用工作页面分别命名为Rainbow和Violet，对应不同的微球类型。 在仪器配置阶段，需确保FACSAriaClass的设置正确，包含所需激光波长。接下来，清理参数列表，只保留与实验相关的FSC、SSC和三种荧光参数（FITC、APC和DAPI），所有参数都设置为线性模式和面积信号，FSC和荧光参数还需选择高度信号。 创建获取模板是数据分析的关键步骤。在"通用工作页面Rainbow"上，应构建8个图形，第一个为双参数散点图，用于观察FSC-A和SSC-A，其余7个为单参数直方图，分别对应每个荧光通道。通过拖动工具栏的绘图工具并在页面上单击，可以创建和调整图形大小。单个微球的矩形门设置在FSC-A和SSC-A大约100,000的位置，这有助于筛选出单粒子事件。 通过持续分析30-60次的QC数据，可以评估激光延迟时间、面积因子等关键指标的趋势，确保仪器在多参数条件下的稳定性。在改变鞘液压力等条件时，建议为每种条件建立单独的"实验"，以避免变量混淆。 总结来说，这份文档详细介绍了使用Rainbow和UV beads进行质控的过程，以及Diva软件的操作步骤，对于流式细胞术的使用者而言，是进行日常维护和操作训练的重要参考资料。