对氧磷酶1（PON1）的原核表达与家蚕生物反应器中的活性研究

"对氧磷酶的表达及活性研究" 对氧磷酶1（PON1，全称为paraoxonase1）是一种广泛存在于生物体内的非专一性酯酶，具有重要的生物功能。该酶主要通过催化磷酸酯键的水解，能够分解有机磷酸、芳香羧酸酯和氨基甲酸酯类化合物，对于消除有机磷杀虫剂和神经毒剂具有显著作用。在本研究中，研究人员李霞、李晓瑞等人通过构建原核表达载体pET-32a-PON1，成功地在大肠杆菌BL21（DE3）中表达了对氧磷酶1基因。 实验过程中，研究人员采用IPTG（异丙基-β-D-硫代半乳糖苷）诱导大肠杆菌表达目的蛋白，并利用镍柱亲和层析方法对表达的蛋白质进行纯化。纯化后的蛋白质用于制备抗对氧磷酶1的抗体，为后续的免疫学研究提供了基础。 此外，研究团队还运用bac-to-bac系统构建了重组杆状病毒vBmPON1，该病毒被用来感染家蚕BmN细胞，以实现对氧磷酶1在家蚕中的表达。通过western blotting技术鉴定，证实目的蛋白PON1在家蚕幼虫和蚕蛹中都有表达，并且在家蚕幼虫的血淋巴中，PON1蛋白主要分布于上清部分，这为蛋白的进一步分离纯化提供了便利。 在收集到的发病家蚕幼虫血淋巴样本中，研究人员通过过滤、分级离心及超滤等步骤初步处理，对目标蛋白的活性进行了检测。结果显示，家蚕生物反应器成功表达了具有活性的对氧磷酶1，这为比较其与哺乳动物体内天然PON1的差异研究提供了重要的实验材料。 此项研究属于生物技术领域，特别是分子生物学和生物制药技术，利用家蚕生物反应器作为表达系统，展示了其在生产具有生物活性的蛋白质方面的潜力。这种表达和活性的研究对于理解PON1的功能特性，以及开发可能用于解毒或治疗相关疾病的新策略具有重要意义。同时，这也为家蚕生物反应器技术平台在生物多肽药物研究中的应用开辟了新的途径。