大鼠髓源性DC培养方法：从未成熟到成熟

"大鼠不同表型骨髓源树突状细胞的培养与鉴定" 这篇论文主要探讨了如何培养和鉴定不同成熟状态的大鼠髓源性树突状细胞（DCs）。树突状细胞在免疫系统中起着关键作用，它们是重要的抗原提呈细胞，能够启动适应性免疫反应。实验方法包括以下几个方面： 1. 细胞分离与纯化：首先，研究人员从大鼠骨髓中分离并纯化单个核细胞。这一步通常涉及密度梯度离心和细胞粘附法，以去除非单核细胞成分。 2. 细胞培养：纯化的骨髓单个核细胞在含有50ng/ml重组大鼠粒-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）和50ng/ml白细胞介素-4（IL-4）的完全培养基中培养7天。GM-CSF和IL-4有助于促进DCs的增殖和分化。 3. DCs成熟诱导：接下来，通过添加特定刺激物来促使DCs成熟。其中，40ng/ml的肿瘤坏死因子-α（TNF-α）用于24小时的刺激以获得“半成熟”DCs（smDCs）。同时，用1μg/ml的脂多糖（LPS）刺激培养24小时以获得成熟DCs（mDCs），而不加刺激的培养则得到未成熟DCs（imDCs）。 4. 细胞鉴定：通过倒置相差显微镜观察细胞形态，流式细胞术检测细胞表面标志物如OX62、MHC-Ⅱ、CD80和CD86的表达，以及ELISA检测细胞因子（如IL-1β、IL-10等）的分泌。此外，还评估了DCs对异基因淋巴细胞的活化能力。 实验结果显示，smDCs的形态特征介于imDCs和mDCs之间，其体积、树突长度和数目有所变化。所有三种类型的DCs都高表达OX62、MHC-Ⅱ、CD80和CD86，表明它们具有成熟的DC特性。然而，细胞因子分泌量的比较显示，imDCs和smDCs分泌各种细胞因子的水平低于mDCs，且imDCs分泌IL-1β与smDCs无显著差异，而IL-10的表达水平在三者间没有显著差异。 结论指出，利用GM-CSF、IL-4和TNF-α的体外培养策略是一种有效的方法，可以获取不同成熟状态的大鼠髓源性DCs，这对于理解DCs的功能以及在免疫调节和疫苗研究等领域具有重要意义。 关键词：树突细胞；细胞培养技术；巨噬细胞集落刺激因子；鉴定 中图分类号：R329.24 文献标识码：A 这项研究为了解大鼠DCs的生物学特性提供了实验基础，对于未来免疫疗法和疾病模型的研究提供了宝贵的参考。