EXO70E2互作蛋白的酵母双杂交筛选研究

"拟南芥Exocyst复合体亚基EXO70E2互作蛋白的酵母双杂交筛选" 这篇论文主要关注的是拟南芥（Arabidopsis thaliana）中的Exocyst复合体，特别是其亚基EXO70E2。Exocyst复合体是一个由八个不同蛋白质组成的八聚体，它在细胞的外泌过程（Exocytosis）中起着关键的栓系作用，这个过程涉及囊泡向细胞膜的定向运输和融合。外泌过程对于植物的生长发育和应对环境压力（如抗逆性）至关重要。 EXO70E2是Exocyst复合体的一个非传统外泌途径（Unconventional Protein Secretory, UPS）中的成员，参与了一种被称为EXPO（Exocyst-Positive Organelle）的新型外泌膜室的形成。这个特殊的亚基可能在特定的细胞运输路径中具有特殊的功能。 研究者运用酵母双杂交技术来寻找与EXO70E2相互作用的蛋白质，这是分子生物学中常用的一种方法，用于鉴定蛋白质之间的相互作用。他们首先通过PCR技术获取了EXO70E2的cDNA序列，并将其插入到酵母双杂交系统中的诱饵载体pGBKT7中，创建了pGBKT7-EXO70E2。实验结果显示，这个诱饵质粒在酵母细胞中可以正常表达，没有毒性效应，也没有转录自激活活性，这表明它适合用于后续的筛选实验。 在建立了有效的酵母双杂交系统后，研究人员对拟南芥的“Mate&Plate™”cDNA文库进行了筛选，寻找与EXO70E2有交互作用的基因。结果显示，共有84个阳性克隆被鉴定出来，这些克隆编码的蛋白质包括干旱诱导基因、NAD(P)H脱氢酶以及一些转录因子。这些发现暗示EXO70E2可能通过参与外泌过程，影响了植物对干旱等环境压力的响应，以及细胞内的多种生理过程。 关键词涵盖了植物学、EXO70E2、Exocyst复合体以及酵母双杂交技术，表明这项工作不仅深化了对Exocyst复合体在植物中的作用的理解，也为探究EXO70E2的生理功能及其与其他蛋白质相互作用的机制提供了基础。这项研究可能有助于未来揭示植物对外界环境适应性的分子机制，对于农作物的遗传改良和抗逆性增强具有潜在的应用价值。