高效液相色谱(HPLC)——固定相与流动相解析

"液相色谱相关知识，包括高效液相色谱仪的构成、特点以及固定相和流动相的介绍" 液相色谱是一种广泛应用于化学和生物学分析中的分离技术，其基本原理是利用样品组分在固定相和流动相之间的分配差异来实现分离。在液相色谱中，固定相和流动相是两个关键组成部分。 六. 固定相： 固定相是色谱柱中的不动部分，它决定了样品分子的保留行为。根据孔隙深度，固定相可以分为表面多孔型和全多孔型两种类型。 1. 表面多孔型固定相（薄壳型填料）： 这类固定相的基体通常是实心的玻璃球，外层覆盖有一层多孔活性材料，如硅胶、氧化硅或氧化铝。表面多孔型固定相具有较高的柱效，由于颗粒较大且渗透性好，因此在梯度淋洗时能够快速达到平衡，特别适合常规分析使用。 流动相： 流动相是液相色谱中的移动成分，它携带样品通过色谱柱。流动相的选择应与待分析物的性质相匹配，以确保适当的保留时间和分离效果。在高效液相色谱（HPLC）中，通常采用高压输液泵来推动流动相，以提高流速和分析效率。 高效液相色谱(HPLC)的特点： - 高柱效：使用微米级别的规则均匀颗粒作为固定相，显著提高了分离效率。 - 快速分析：通过高压输液泵，可以在几分钟内完成一般样品的分析，对于复杂样品，分析时间也可控制在数十分钟以内。 - 高灵敏度：结合各种高灵敏度检测器，如紫外吸收检测器、荧光检测器等，大大提升了检测限，使得HPLC可以分析低浓度甚至痕量的物质。 液相色谱法的分类： 根据两相的物理状态，色谱法分为气相色谱法（GC）和液相色谱法（LC）。GC适用于分离挥发性化合物，而LC则适合分离低挥发性或非挥发性、热稳定性差的物质。 高效液相色谱仪主要部件： 液相色谱仪通常包括溶剂贮存系统、输液泵、进样器、色谱柱、检测器和数据处理系统等组件。不同制造商如Waters公司、Agilent公司、岛津公司等提供了多种型号的HPLC设备，满足不同实验需求。 液相色谱特别是高效液相色谱，因其高效、快速和灵敏的特点，在化学、生物、药物分析等领域扮演着重要角色。固定相和流动相的选择与优化，以及对HPLC仪器的了解，都是进行有效分析的关键。