对虾白斑综合征病毒VP95基因表达分析与抗体制备

"对虾白斑综合征病毒结构蛋白基因vp95表达时序分析及其抗体的制备 (2014年)" 这篇论文主要探讨了对虾白斑综合征病毒(WSSV)的一个关键结构蛋白基因——vp95的表达时序及抗体的制备。WSSV是一种严重影响对虾养殖业的病毒，其基因组庞大，包含多个开放阅读框(ORF)编码多种蛋白质。VP95蛋白是WSSV的结构蛋白，存在于病毒的囊膜蛋白和核衣壳中，由ORF wsv442编码，基因全长为2400个碱基对。 论文首先对vp95基因的表达时序进行了分析，结果显示该基因属于晚期基因，这意味着它在病毒感染细胞后的后期阶段才会被转录和表达。了解这种表达模式对于理解病毒生命周期和潜在的抗病毒策略至关重要。 为了进一步研究VP95蛋白的功能，研究人员选取了编码200个氨基酸的基因片段（1051~1650nt）进行克隆表达。这个片段被插入到pET-His载体中，然后转化到大肠杆菌BL-21(DE3)中进行表达。通过诱导剂IPTG诱导表达后，细菌被收集并超声破碎，使用Ni2+-NTA agarose纯化出可溶性的重组蛋白His-VP95-M200。 接着，研究人员利用纯化的重组蛋白免疫小鼠，制备出抗VP95的抗血清。通过HiTrap NHS-activated HP亲和层析纯化柱进一步纯化抗体，以去除血清中的杂质。 Western blot分析证实，无论是未纯化的血清还是纯化的抗体，都对病毒粒子中的VP95蛋白显示出高滴度的反应，并且具有高度特异性。 这项工作为后续研究VP95蛋白在病毒装配过程中的作用，以及它在病毒入侵宿主细胞过程中可能扮演的角色奠定了基础。此外，制备的抗VP95抗体可以用于检测WSSV感染，为对虾疾病的诊断和防治提供工具。 关键词：对虾白斑综合征病毒，VP95，转录分析，多克隆抗体 这篇研究属于自然科学领域，特别是生物学和分子生物学，对于了解WSSV的生物学特性，以及开发有效的对虾疾病防控措施具有重要意义。