第 41 卷 第 6 期
2013 年 11 月
河南师范大学学报(自然科学版)
Journal o
f
Henan Normal Universit
y
(N atural Science Edition)
Vol .41 No .6 乙
Nov .2013
文章编号 :1000 - 2367(2013)06 -0167 - 05
N F‐κB 信 号 通 路 在 大 鼠 肝 再 生 中
调 节 肝 细 胞 增 殖 的 机 理 研 究
王彬彬
1 ,2
,常翠芳
2
,鲁艳平
1 ,2
,贾艺峰
2
,徐存拴
1 ,2
(1 .河南师范大学 生命科学学院 ,河南 新乡 453007 ;2 .河南省‐科技部共建细胞
分化调控国家重点实验室培育基地 ,河南 新乡 453007)
摘 要 :
为了解大鼠肝再生中肝细胞 NF‐κB 信号通路对肝细胞增殖的调节作用 ,用 Rat Genome 230 2 .0 芯片
检测大鼠肝再生中 NF‐κB 信号通路相关基因表达变化发现 ,芯片含 138 个 NF‐κB 信号通路基因 ,其中 46 个基因与
大鼠肝再生相关 .用 Ingenuity Pathway Analysis 9 .0(IPA)软件解析上述基因表达变化预示的该信号通路调节肝细
胞增殖作用发现 ,该通路的白细胞介素‐1(IL‐1)途径在大鼠肝再生起始阶段促进肝细胞增殖 ,生长因子(GF)途径在
进展阶段促进肝细胞增殖 ,肿瘤坏死因子‐α(TNF‐α)途径在起始阶段促进肝细胞增殖 ,终止阶段抑制肝细胞增殖 .
关键词 :
大鼠肝再生 ;肝细胞增殖 ;NF‐κB 信号通路 ;通路创建与分析
中图分类号 :
Q257
文献标志码 :
A
肝脏是动物的重要器官 ,肝细胞约占肝脏细胞总数的 65% 和总肝量的 70% ~ 80% ,承担着解毒 、代谢 、
胆汁合成 、生物转化等功能
[1 - 2]
.正常情况下 ,成年肝脏的绝大多数肝细胞处于静止状态 ,但当肝损伤或部分
肝切除(
p
artial hepatectomy ,PH)后 ,残肝的肝细胞迅速进入细胞周期循环补偿丢失的肝组织
[3]
,此过程称
为肝再生 ,分为起始(PH 后 2 ~ 6 h) ,进展(PH 后 12 ~ 72 h)和终止(PH 后 120 ~ 168 h)3 个阶段
[4 ,5]
,受包
括 NF‐κB 信号通路在内的许多信号通路调控
[6]
.为了解大鼠肝再生中肝细胞的 NF‐κB 信号通路对肝细胞增
殖的调节作用及其机理 ,本文用
p
ercoll 密度梯度离心分离大鼠肝细胞 ,用大鼠基因组基因表达谱芯片 Rat
Genome 230 2 .0 检测 NF‐κB 信号通路基因在大鼠肝再生中表达变化 ,用通路创建与分析(IPA)软件分析这
些变化预示的该信号通路调节肝细胞增殖的机理 .
1 材料与方法
1 .1 大鼠肝再生模型的制备与肝细胞分离 、鉴定
按本研究组先前报道的方法制备大鼠 2/3 肝切除模型(PH 组)和手术对照 ,又称假手术模型(SO 组) ,
分离大鼠肝细胞
[7 ,8]
,用肝细胞标志蛋白 ALB 和 G6P 的免疫组化鉴定肝细胞 .实验用肝细胞纯度和活性均
辰 95% .
1 .2 Rat Genome 230 2 .0 芯片检测及数据整理
按本研究组先前报道的方法分离 、纯化肝细胞的 RNA
[9]
.对每张芯片的表达信号值做均一化处理 ,用实
验组比对照组的均一化值得到基因的比值(ratio 值) .当一个基因的 ratio 值 辰 对照 3 倍 ,或 尘 对照 0 .33 倍
时 ,视该基因发生有意义表达变化 .同时 ,F 检验 PH 组与 SO 组的基因表达变化差异性
[10]
,将差异显著
(0 .01 尘
p
< 0 .05)或极显著(
p
< 0 .01) 、至少在 PH 后一个恢复时间点发生有意义表达变化的基因视为大鼠
收稿日期 :2013‐03‐15 ;接收日期 :2013‐05‐10
基金项目 :国家 973 项目前期研究专项基金资助项目(2010CB534905)
作者简介 :王彬彬(1986 - ) ,女 ,河南省义马市人 ,河南师范大学硕士毕业生 ,主要从事系统生物学研究 .
通讯作者 :徐存拴(1958 - ) ,男 ,河南省林州市人 ,教授 ,博士生导师 ,主要从事再生生物学与细胞分化调控机理研究 ,
E‐mail :xucs@ x263 .net .