沙岭猪ADPN基因克隆与酵母真核表达成功验证

本文主要探讨了沙子岭猪脂联素基因的克隆与真核表达技术在科研领域的应用。作者罗佳捷、宋虎威等人在中国科技论文在线上发表了这篇首发论文，他们以GenBank数据库中记录的猪脂联素(ADPN)基因序列为基础，设计了ADPN-P1和ADPN-P2两种引物。通过聚合酶链反应(PCR)技术，成功从沙子岭猪的脂肪组织cDNA中扩增出ADPN基因。这个基因片段被连接到pMD18-T载体上，形成重组克隆载体pMD-ADPN。 接着，研究团队挑选出阳性克隆并进行了测序，以确保基因的准确性。他们进一步将ADPN基因整合到真核表达载体pPICZaA中，构建了沙子岭猪脂联素基因的酵母重组表达载体pPICZaA-ADPN。通过电转化技术，这个基因被导入毕赤酵母GS115中，形成了沙子岭猪脂联素基因重组酵母表达菌GS115-ADPN。为了验证基因表达的有效性，作者使用了Western Blot和Bradford方法来检测目的蛋白的表达和分泌情况。 结果显示，沙子岭猪脂联素基因的大小为732bp，编码244个氨基酸，与GenBank上的猪脂联素基因序列具有100%的同源性。实验数据表明，脂联素在毕赤酵母GS115中得到了正确的分泌表达，并展现出一定的免疫活性。其蛋白表达水平达到了28.5μg/mL，证明了pPICZaA-ADPN真核表达载体的成功构建和功能。 这篇论文的关键词涵盖了脂联素、脂肪组织、猪、毕赤酵母、基因表达以及克隆等核心概念，对于理解猪脂联素基因的分子生物学研究以及在生物技术领域的应用具有重要意义。通过这些步骤，研究人员不仅提供了基因克隆和表达的技术细节，也为后续的生物学研究和可能的药物开发提供了有价值的基础。