基于长引物PCR法构建同向串联DNA序列的新方法

0 下载量 187 浏览量 更新于2024-09-05 收藏 952KB PDF 举报
同向重复串联DNA序列的构建 同向重复串联DNA序列的构建是指通过特定的 PCR 方法将目标 DNA 序列构建成一系列同向串联重复序列。这种方法主要特征是设计一对 PCR 引物,其中一条与长引物含有与另一条反向互补,且退火温度高得多。 在本研究中,采用长引物 PCR 法将拟南芥干旱应答元件序列(DRE)序列构建成一系列同向串联重复序列。这种方法的关键是设计一对 PCR 引物,其中一条反向引物设计为长引物,其 3’ 端含有一段和 5’ 端反向互补序列。PCR 程序设高低两个退火温度,从低退火温度开始,先在较低的退火温度产生 1-2 个拷贝的产物,在较高退火温度下替代正向引物作长引物,和反向引物产生多个拷贝(一般为 1-4 个)的同向串联 DRE。 这种方法产生的同向重复串联 DNA 序列在转录因子鉴定、免疫系统细胞发育研究等方面有潜在用途。该方法的优点是可以快速、 高效地生成同向重复串联 DNA 序列,且不需要复杂的 clone 步骤。 在生物技术领域中,同向重复串联 DNA 序列的构建有着广泛的应用前景。例如,在转录因子鉴定中,可以使用同向重复串联 DNA 序列来检测转录因子的结合活性。在免疫系统细胞发育研究中,同向重复串联 DNA 序列可以用来研究免疫细胞的发育和分化过程。 此外,同向重复串联 DNA 序列的构建也可以应用于其他领域,例如基因治疗、植物生物技术等。同向重复串联 DNA 序列的构建是一种有前途的生物技术方法,具有广泛的应用前景。 知识点: 1. 同向重复串联 DNA 序列的构建方法 2. 长引物 PCR 法的应用 3. DRE 序列的构建 4. 同向重复串联 DNA 序列在生物技术领域中的应用前景 5. 转录因子鉴定中的同向重复串联 DNA 序列应用 6. 免疫系统细胞发育研究中的同向重复串联 DNA 序列应用 7. 同向重复串联 DNA 序列在基因治疗和植物生物技术等领域中的应用前景