枯草芽孢杆菌ade基因在大肠杆菌MBP融合表达的活性鉴定

本文主要探讨了枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）的ade基因在大肠杆菌（Escherichia coli）中的MBP融合表达及其活性鉴定。ade基因被认为编码枯草芽孢杆菌中的腺嘌呤脱氨酶，这是一种关键的生物催化剂，负责分解腺嘌呤（adenine）分子，对于维持DNA和RNA的正常代谢至关重要。 首先，作者通过PCR技术扩增了枯草芽孢杆菌的ade基因，并将其插入到表达载体pMal-c2x中，构建了一个MBP融合蛋白的表达系统。MBP是一种已知的亲和标签蛋白，常用于蛋白质纯化过程中，由于其对麦芽糖的特异性结合，可以方便地将目标蛋白从混合物中分离出来。 随后，研究人员利用异丙基硫代半乳糖苷（IPTG）作为诱导剂，启动了融合蛋白的表达。通过MBP亲和层析法，成功纯化了这种融合蛋白，编号为104700。通过SDS-PAGE（聚丙烯酰胺凝胶电泳）技术对表达和纯化结果进行了验证，确认了融合蛋白的正确合成和分离。 实验的核心部分是对融合酶蛋白的酶学性质进行了初步研究，结果显示该融合蛋白具有显著的腺嘌呤脱氨酶活性。这强有力地证实了ade基因确实是编码这种关键酶的基因。酶活性的测定可能是通过测定底物腺嘌呤的消耗或产物次黄嘌呤（inosine）的生成来完成的，这表明融合蛋白在大肠杆菌中具有预期的功能。 本研究不仅提供了枯草芽孢杆菌ade基因在另一种宿主细胞中的表达方法，也为后续的生物学研究和应用提供了基础，比如可能应用于废水处理、生物技术工业或者药物研发等领域，因为腺嘌呤脱氨酶在这些领域都有潜在的应用价值。同时，该研究也展示了分子生物学技术如基因克隆、蛋白质工程和酶活性测定在生物科学中的重要性。