"HPLC培训教程及应用原理详解"

2 下载量 53 浏览量 更新于2024-03-12 收藏 110KB DOC 举报
HPLC(高效液相色谱法)在药品分析中应用越来越广泛,因此每一个药品分析人员都应该了解并掌握其原理和应用。液相色谱法的分离原理是溶于流动相中的各组分通过固定相时,由于与固定相发生作用的大小、强弱不同,从而先后从固定相中流出。液相色谱法最早由俄国植物学家茨维特在1906年发现,后来发展出纸色谱法、薄层色谱法、气相色谱法和液相色谱法。HPLC是液相色谱法的一种高效改进,其柱效高,时刻短,因此被广泛应用于药品分析领域。 HPLC培训教程.doc中提到我国药典收载的HPLC法项目和数量比较表。根据1985年、1990年、1995年和2000年版本的我国药典,在鉴别项目、检查项目和含量测定项目中,HPLC法的数量都有不同程度的增加,说明HPLC法在药品分析中的重要性逐渐增强。 液相色谱理论的进展简况在文档中也有详细介绍。色谱法的分离原理是溶于流动相中的各组分通过固定相时,由于与固定相发生作用的大小、强弱不同,从而先后从固定相中流出。液相色谱法最早由俄国植物学家茨维特在1906年发现,后来发展出纸色谱法、薄层色谱法、气相色谱法和液相色谱法。HPLC是液相色谱法的一种高效改进,其柱效高,时刻短,因此被广泛应用于药品分析领域。这些知识对于药品分析人员来说是非常重要的,可以帮助他们更好地掌握分析方法和技术。 在HPLC培训教程.doc中,也对液相色谱法的具体应用进行了介绍。文档强调了HPLC在药品分析中的重要性,以及每一个药品分析人员都应该了解并掌握其原理和应用。通过学习HPLC的理论知识和实际操作,药品分析人员可以更好地进行药品的分析和检测工作,为保障药品质量和安全做出更大的贡献。 总之,HPLC培训教程.doc中涵盖了HPLC的理论知识和实际应用,对于药品分析人员来说是一个非常有价值的学习资料。理论知识的掌握可以帮助他们更好地理解HPLC的原理,而实际应用的介绍则可以指导他们在实际工作中更好地运用HPLC进行药品分析和检测。这对于提高药品分析水平,保障药品质量和安全具有重要的意义。因此,建议每一个药品分析人员都应该认真学习和掌握HPLC的相关知识和技术,以更好地为药品分析工作做出贡献。
2022-12-25 上传
HPLC 液相色谱培训教程 我国药典收载高效液相色谱法项目和数量比较表: 方法 项目 数量 1985 年版 1990 年版 1995 年版 2000 年版 HPLC 法 鉴别 9 34 150 检查 12 40 160 含量测定 7 60 117 387 鉴于 HPLC 应用在药品分析中越来越多,因此每一个药品分析人员应该掌握并应用 HPLC。 I.概论 一、液相色谱理论发展简况 色谱法的分离原理是:溶于流动相(mobile phase)中的各组分经过固定相时,由于与固定相(stationary phase)发生作用(吸附、分配、离子吸引、排阻、亲和)的大小、强弱不同,在固定相中滞留时间不同, 从而先后从固定相中流出。又称为色层法、层析法。 色谱法最早是由俄国植物学家茨维特(Tswett)在 1906 年研究用碳酸钙分离植物色素时发现的,色谱法 (Chromatography)因之得名。后来在此基础上发展出纸色谱法、薄层色谱法、气相色谱法、液相色谱法。 液相色谱法开始阶段是用大直径的玻璃管柱在室温和常压下用液位差输送流动相,称为经典液相色谱法, 此方法柱效低、时间长(常有几个小时)。高效液相色谱法(High performance Liquid Chromatography, HPLC)是在经典液相色谱法的基础上,于 60 年代后期引入了气相色谱理论而迅速发展起来的。它与经典液 相色谱法的区别是填料颗粒小而均匀,小颗粒具有高柱效,但会引起高阻力,需用高压输送流动相,故又 称高压液相色谱法(High Pressure Liquid Chromatography,HPLC)。又因分析速度快而称为高速液相色谱 法(High Speed Liquid Chromatography,HSLP)。也称现代液相色谱。 二、HPLC 的特点和优点 HPLC 有以下特点: 高压-压力可达 150~300Kg/cm2。色谱柱每米降压为 75 Kg/cm2 以上。 高速-流速为 0.1~10.0 ml/min。 高效-可达 5000 塔板每米。在一根柱中同时分离成份可达 100 种。 高灵敏度-紫外检测器灵敏度可达 0.01ng。同时消耗样品少。 HPLC 与经典液相色谱相比有以下优点: 速度快-通常分析一个样品在 15~30 min,有些样品甚至在 5 min 内即可完成。 分辨率高-可选择固定相和流动相以达到最佳分离效果。 灵敏度高-紫外检测器可达 0.01ng,荧光和电化学检测器可达 0.1pg。 柱子可反复使用-用一根色谱柱可分离不同的化合物。 样品量少,容易回收-样品经过色谱柱后不被破坏,可以收集单一组分或做制备。 三、色谱法分类 按两相的物理状态可分为:气相色谱法(GC)和液相色谱法(LC)。气相色谱法适用于分离挥发性化合物。GC 根据固定相不同又可分为气固色谱法(GSC)和气液色谱法(GLC),其中以 GLC 应用最广。液相色谱法适用于 分离低挥发性或非挥发性、热稳定性差的物质。LC 同样可分为液固色谱法(LSC)和液液色谱法(LLC)。此外 还有超临界流体色谱法(SFC),它以超临界流体(界于气体和液体之间的一种物相)为流动相(常用 CO2), 因其扩散系数大,能很快达到平衡,故分析时间短,特别适用于手性化合物的拆分。 按原理分为吸附色谱法(AC)、分配色谱法(DC)、离子交换色谱法(IEC)、排阻色谱法(EC,又称分子筛、凝 胶过滤(GFC)、凝胶渗透色谱法(GPC)和亲和色谱法。(此外还有电泳。) 按操作形式可分为纸色谱法(PC)、薄层色谱法(TLC)、柱色谱法。 四、色谱分离原理 高效液相色谱法按分离机制的不同分为液固吸附色谱法、液液分配色谱法(正相与反相)、离子交换色谱 法、离子对色谱法及分子排阻色谱法。 1.液固色谱法 使用固体吸附剂,被分离组分在色谱柱上分离原理是根据固定相对组分吸附力大小不同而 分离。分离过程是一个吸附-解吸附的平衡过程。常用的吸附剂为硅胶或氧化铝,粒度 5~10μm。适用于 分离分子量 200~1000 的组分,大多数用于非离子型化合物,离子型化合物易产生拖尾。常用于分离同分异 构体。 2.液液色谱法 使用将特定的液态物质涂于担体表面,或化学键合于担体表面而形成的固定相,分离原理 是根据被分离的组分在流动相和固定相中溶解度不同而分离。分离过程是一个分配平衡过程。 涂布式固定相应具有良好的惰性;流动相必须预先用固定相饱和,以减少固定相从担体表面流失;温度的 变化和不同批号流动相的区别常引起柱子的变化;另外在流动相中存在的固定相也使样品的分离和收集复 杂化。 由于涂布式固定相很难避免固定液流失, 现在已很少采用。 现在多采用的是化学键合固定相, 如 C18、 C8、氨基柱、氰基柱和苯基柱。 液液色谱法按固