埃及基础与应用科学杂志4（2017）9完整文章斑秃患者血清维生素D水平的研究Nora Mohamed Mostafa Darwisha，Hamdy Fouad Marzoka，Mohamed Ali Mohamed Gaballaha，Hend Elsaudi Abdellatifba埃及曼苏拉大学医学院b埃及曼苏拉大学学生医院阿提奇莱因福奥文章历史记录：2016年8月14日收到2016年11月30日收到修订版，2016年2016年12月18日在线发布关键词：维生素D斑秃A B S T R A C T目的：斑秃（Alopecia areata，AA）是一种由CD4+和CD8+ T细胞共同介导的自身免疫性疾病，细胞因子在其中起重要作用。目前的研究旨在测量AA患者血清25羟基维生素D[25（OH）D]水平，并与我们当地的对照组进行比较研究对象和方法：本研究共招募50名受试者，30名AA患者和20名对照。所有患者均接受详细的病史采集和检查，以检测AA的类型、严重程度（SALT评分）采集所有受试者的血液样本进行全血细胞计数，并评估血清25（OH）D、甲状旁腺激素、随机血糖和钙水平。结果：AA患者血清25（OH）D水平明显低于对照组。血清25（OH）D水平男性明显低于女性。患者组血清钙水平明显低于对照组。关于血液照片;唯一的显著差异是红细胞计数，与对照组相比，AA组的红细胞计数水平显著较低患者组血清维生素D与血清钙SALT评分与病程呈正相关所有头皮脱发和体毛脱落的患者病程均超过6个月，而病程小于6个月的患者大多数SALT评分较低。结论：患者血清25（OH）D水平明显低于对照组。©2016 曼 苏 拉 大 学 . 由 爱 思 唯 尔 公 司 制 作 和 主 持 这 是 一 篇 基 于 CC BY-NC-ND 许 可 证 的 开 放 获 取 文 章（http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/）。1. 介绍斑秃（AA）是一种常见的慢性疾病，导致非瘢痕性脱发。AA表现为不同的临床模式，如片状脱发;面部和头皮毛发完全或接近完全脱落（全秃，AT）;或全身和头皮毛发完全脱落（普秃，AU）[1]。虽然提出了许多不同的原因，AA的确切潜在病因是有问题的。然而，免疫、环境、心理和遗传因素是最有力的解释[2]。缩略语：1，25（OH）2D3，1，25-二羟基维生素D3; 25（OH）D，25-羟基维生素D;AA，斑秃; AT，全秃; AU，普秃; PTH，甲状旁腺激素; VDR，维生素D受体。*通讯作者：皮肤科，男科性病，Mansoura大学医学院，El-Gomhoria街，埃及曼苏拉。电子邮件地址：dr.h. hotmail.com （H.F. Marzok），mohali212@yahoo. com（M.A.M. Gaballah）、nonaelsha3nona@hotmail.com（H.E. Abdellatif）。维生素D在UV-B光（290-315 nm）的作用下在表皮角质形成细胞中合成，维生素D被发现具有免疫调节作用。1，25-二羟基维生素D3（1，25（OH）2D3）是维生素D的活性形式，是先天性和适应性免疫应答的调节剂之一，因为它调节T淋巴细胞和B淋巴细胞的免疫功能和活性[4]。1，25（OH）2D3在毛囊生物学中具有重要作用。检测表皮角质形成细胞和间充质毛乳头细胞中维生素D受体（VDR）的表达[5]。VDR在角质形成细胞中的表达对于保持正常的毛发周期是必要的[6]。VDR的缺乏与表皮分化和毛囊生长减少有关。此外，患有1，25（OH）2D3-抗性佝偻病II型和VDR敲除小鼠的患者表现出包括AT的表型[7]。维生素D状态的评估不是基于血清1，25（OH）2D3血清水平的测量，因为它们相对较低且受到严格的调节。维生素D的状况是通过测量25-羟基维生素D（25（OH）D）来评估的，这是一个指标的供应http://dx.doi.org/10.1016/j.ejbas.2016.12.0012314- 808 X/©2016曼苏拉大学。由爱思唯尔公司制作和主持这是一篇基于CC BY-NC-ND许可证的开放获取文章（http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/）。可在ScienceDirect上获得目录列表埃及基础与应用科学杂志杂志主页：www.elsevier.com/locate/ejbas10N.M.M. Darwish等人 /埃及基础与应用科学杂 志 4（2017）9-14而不是功能。它是人体血清中维生素D最稳定和最丰富的代谢产物，半衰期约为3周，使其成为维生素D状态的最合适指标[8]。与对照组相比，AA患者的25（OH）D和1，25（OH）2 D3浓度显著降低，甲状旁腺激素（PTH）平均值升高[5，9]。此外，维生素D补充剂可能对AA等人类自身免疫性疾病具有预防作用[10]。此外，有人认为调节性T细胞的活化可以解释维生素D类似物在治疗AA中的可能功效[9]。本研究旨在评价本地区不同临床类型再障患者血清维生素D水平。2. 受试者和方法这项工作被设计为前瞻性病例对照研究，并得到曼苏拉大学医学院伦理委员会的批准。该研究包括50名受试者，30名AA患者和20名年龄和性别匹配的健康对照。研究对象选自曼苏拉大学医院皮肤科、男科和性病科门诊。从所有参与者处获得知情书面同意。所有与会者均来自Dakahlia省。2.1. 科目a. 入选标准：1.入选研究前至少6个月未接受任何AA治疗的任何类型AA的所有患者b. 排除标准：1. 在过去6个月内服用维生素D补充剂、铁制剂、维生素B、叶酸或钙（Ca）补充剂的任何患者。2. 接受局部维生素D3类似物治疗的患者3. 已知患有维生素D缺乏症的患者（以避免选择偏倚）。4. 患有改变血液25（OH）D水平的任何相关疾病的患者，如白癜风、银屑病、SLE、肾病、肝病、癌症和自身免疫性疾病。本研究的所有参与者均接受以下治疗：1. 完整的历史记录。2. 一般检查以排除可能影响血液维生素D水平的相关全身性疾病。3. 皮肤科检查，包括皮肤、毛发、指甲和口腔粘膜。4. AA程度的临床评估通过将头皮分为4个象限（图1）并目视确定每个象限中头皮脱发的百分比，然后将数字加在一起，最大得分为100%，从而确定头皮脱发的程度。这是根据脱发严重程度工具或SALT评分确定的[11]。其包括头皮脱发（S）、体毛脱落（B）和指甲受累（N）的评估，如下所示：S：头皮脱发S0 =无脱发。S1 = 25%脱发。S2 = 25S3 = 50S4 = 75图1.一、Olsen/Canfield工具用于测定头皮毛发脱落%[11]。a = 75-95%脱发。b =96-99%脱发。S5 =100%脱发。B：身体脱发B0 =无体毛脱落。B1 =一些身体脱发。B2 = 100%身体（不包括头皮）脱发。N：指甲受累N0 =无指甲受累N1 =部分指甲受累。N2 = 20例甲营养不良受累。脱发的原因有哪些？a. 斑片状b. 蛇病c. totalis（100%头皮脱发）5. 患者分类[12]：根据AA的严重程度将患者分为：轻度AA：根据SALT评分显示脱发25%的患者，共10例。中度AA：根据SALT评分显示脱发25-49%的患者重度AA：根据SALT评分显示脱发>50%的患者，共13例。此外，根据疾病持续时间将患者分为6个月内或6个月以上的患者。6. 标准化的头皮照片，以帮助评估SALT评分。●●●N.M.M. Darwish等人 /埃及基础与应用科学杂 志 4（2017）9-14112.2. 方法从每个参与者抽取7cm3的静脉血样品使用自动血细胞计数仪（Sysmex，BM Egypt Company），将1 mL血细胞收集在EDTA管中进行全血细胞计数（CBC）将其余样品收集在普通试管中，并使其凝结。分离血清，并分成3等份，储存在-20 °C下直至分析：1. 一个等分试样用于随机血糖（RBS）和Ca测定。2. 第二等份用于PTH测定。3. 最后一个等分试样用于25（OH）D测定。2.2.1. Ca和RBS测定使用比色原理试剂盒（bioMerieux，France）。遵循市售试剂盒的生产说明。2.2.2. PTH测定使用ELISA原理，其中将标准品、对照品或患者样品与酶标记的抗体和生物素偶联的抗体在链霉亲和素包被的微孔板孔中同时孵育。在测定孵育结束时，洗涤微孔以除去未结合的组分，并将结合至固相的酶与底物四甲基联苯胺（TMB）孵育然后加入酸性终止溶液以终止反应并将颜色转化为黄色。黄色的强度与样品中完整PTH的浓度成正比。使用校准品所得结果生成吸光度与浓度的剂量响应曲线。对照和患者样本中存在的完整PTH浓度直接从该曲线确定[13]。试剂盒由Cali-biotech Inc.提供，春谷。2.2.3. 3-25（OH）D使用ELISA试剂盒（SunRedbio，上海）评估25（OH）D的血液水平。将25（OH）D加入到包被有生物素标记的人25（OH）D抗体的单克隆抗体酶孔中，并与链霉亲和素- HRP结合形成免疫复合物，然后温育并再次洗涤加入显色剂溶液A、B。液体的颜色变成了蓝色。当加入酸时，颜色最终变成黄色。颜色色度与25（OH）D浓度呈正相关.绘制标准曲线后获得结果2.3. 数据解释和统计分析使用社会科学统计软件包（SPSS for Windows Package 20.0Chi-cago，IL）进行统计分析。定量数据表示为平均值±标准差（SD）或中位数和范围，定性数据表示为数量（n）和百分比（%）。使用直方图、箱形图和Shapiro-Wilk检验结果检验数据的正态性两组间正态分布资料比较采用独立样本t检验。使用Mann-Whitney检验比较违反正态性假设的数据采用卡方（v2）检验比较分类数据。采用受试者工作特征（ROC）分析确定最佳临界值。使用Pearson和Spearman相关系数进行各种变量之间的相关性。P值0.05被认为具有统计学显著性。3. 结果表1显示了研究组的社会人口统计学和临床数据。其中工人13人，学生6人，家庭主妇11人. 20例患者来自农村地区，10例来自城市地区。9例患者有AA既往史4例患者在脱发发作前6个月内有既往感染史。无患者有AA家族史。表2显示了患者和对照组之间进行的不同血液检查的比较。AA组血清维生素D水平明显低于对照组。ROC曲线分析显示，两组之间的临界值为17.23 ng/mL，灵敏度为100%，特异性为99%，曲线 下面积为0.992，p <<0.001（图1）。 2）。在患者组中，男性的维生素D水平显著低于女性，p= 0.009（图3），在对照组中，没有发现男性和女性之间的显著差异，p= 0.45。患者组血清钙水平明显低于对照组。关于血象;唯一的显著差异是红细胞计数，AA组的红细胞计数水平低于对照组，p <<0.001。关于SALT评分，未发现男性和女性之间疾病严重程度存在差异（表3）。在患者组中发现血清维生素D与血清钙之间存在正线性相关（r =0.445，p = 0.01）（图4）。SALT评分与维生素D之间无显著相关性。SALT 评 分 与 疾 病 持 续 时 间 之 间 存 在 强 正 相 关 性 （ r = 0.71 ，p0.0001）。所有AU和AT患者的病程均超过6个月;而大多数病程小于6个月的患者的SALT评分较低（表4）。在患者组中，SALT评分与任何其他变量之间均无显著相关性。在对照组中，维生素D与其他变量之间讨论斑秃（AA）是一种自身免疫性疾病，其特征是生长期毛囊周围的T细胞浸润和细胞因子产生[14]。CD8+T细胞作为效应细胞的帮助下，表1研究组的人口统计学和临床数据变量患者（n = 30）对照组（n = 20）P值年龄（岁）范围平均值± SD7–4428.67 ± 1017–4924.8± 60.12性别男性（n %）13人（43.3%）10人（50%）0.25女性（n %）17人（56.7%）10人（50%）病程<6个月（n %）15人（50%）>6个月（n %）15人（50%）脱发的类型片状AA（n %）20人（66.7%）AT AU（n %）10人（33.3%）SALT评分数量（%）S110人（33.3%）S27人（23.3%）S34人（13.3%）S43人（10%）S51人（3.3%）S4 B3人（10%）S5 B2（6.7）0.05时具有P显著性; n：数量; SD：标准差。12N.M.M. Darwish等人 /埃及基础与应用科学杂 志 4（2017）9-14表2比较两组患者的不同血液检查结果。白细胞（×103/mL）8.33 ± 1.8 7.78 ± 2.1>0.05血红蛋白（g/dL）12.60 ± 1.4 13.46 ± 1.8>0.05血小板（×103/mL）223.83 ± 29.3 244.35 ± 60.5>0.050.05时具有P显著性; n：数量; SD：标准差。图二. 对两组维生素D水平进行ROC曲线分析。CD 4 +T细胞和调节/抑制CD 4 +/CD 25+细胞的缺陷可以解释疾病的自身攻击性[15]。已知该疾病发生于各种自身免疫性疾病，例如类风湿性关节炎（RA）、I型糖尿病（DM）、白癜风、系统性红斑狼疮（SLE）、甲状腺炎、寻常性天疱疮（PV）、恶性贫血和乳糜泻[16]。1，25（OH）2D3通过其对T和B淋巴细胞、树突细胞和巨噬细胞的不同作用而成为先天性和适应性免疫系统的调节剂，所有这些细胞都表达VDR。一些自身免疫性疾病，包括I型DM、RA、SLE、白癜风、银屑病、多发性硬化症（MS）、炎症性肠病（IBD）和维生素D缺乏症之间的联系已被报道[17]。这一发现表明，维生素D缺乏可能是诱导自身免疫性的环境触发因素[18]。维生素D抑制树突状细胞的形成，这反过来又减少了T细胞的活化和T细胞介导的免疫应答。维生素D也作用于T细胞本身，调节TH1和TH2的分化和活化。它抑制产生干扰素和白细胞介素（IL）-2并激活巨噬细胞的Th 1细胞，以及产生IL 17和IL 22的TH 17细胞[19]。维生素D还增加了调节性CD4+ CD25+调节性T细胞的产生，并增强了其抑制功能，这在自身耐受性中起着非常重要的作用，因此在预防自身免疫中起着非常重要的作用[20]。此外，维生素D及其衍生物在银屑病中的治疗特性通过其通过抑制树突细胞和激活调节性T细胞来抑制TH1应答的能力而被注意到[21]。在目前的研究中，AA患者的血清维生素D水平与对照组相比显着下降。这与其他研究一致[5，9，22，23]。 在目前的研究中，研究组中男性患者的维生素D水平较低。与此类似，与我们的研究结果相反，其他研究报告女性AA患者和对照组的血清维生素D水平较低，他们解释说，由于宗教和社会问题，女性暴露于阳光的程度有限[22，23]。我们的结果与上述研究之间的差异可能是由于我们的样本量小，并且样本是在一年四季中随机收集的，因此海-维生素D的季节性变异没有消除。图三. 研究组男性和女性的维生素D水平。项目患者组对照组P值平均值± SD平均值± SD血清维生素D（ng/mL）7.52± 6.2431.70 ± 12.29<0.001血清钙（mg/dL）7.91± 1.309.23± 0.36<0.001血清PTH（pg/mL）37.09 ± 28.5348.52 ± 35.70.25RBS（mg/dL）92.63 ± 795 ± 6.8>0.05红细胞（×106/mL）4.21± 0.45 ± 0.40.001N.M.M. Darwish等人 /埃及基础与应用科学杂 志 4（2017）9-1413表3研究组雄性和雌性动物的SALT评分分布SALT评分总S 1S 2S 3S 4S 5中四乙S5 B性男性341210213女性733103017总1074313230见图4。研究组维生素D水平与血清钙水平呈显著正线性相关。表4关于疾病持续时间的SALT评分分布。SALT评分病程总少于6个月6个月S 19110S 2527S 3044S 4123S 5011中四乙033S5 B022n= 15n= 15n= 30在目前的工作中，血清钙水平显着降低患者与对照组相比。与此一致，发现当患者变得缺乏维生素D时，肠道钙吸收减少，从而降低钙水平[24]。至于PTH水平，在目前的工作中，患者和对照组之间没有显著差异。 Yilmaz等人[5]发现AA患者和对照组之间的PTH水平无显著差异。此外，发现当血清25（OH）D低时，血清PTH相对较高，但通常仍在正常范围内，并且在许多患者中血清PTH的增加被钝化，如在本研究中[25，26]。关于血象，患者和对照组之间的唯一显著差异是RBC计数，患者的RBC计数水平显著较低然而，患者和对照组之间的血清血红蛋白浓度无显著关于RBS，患者组和对照组之间没有显著差异。与此一致，Sharma等人[27]&Tan等人[28]指出，糖尿病更常发生在AA患者的亲属中，而不是AA患者本身。在本研究中，血清维生素D水平与AA的持续时间或严重程度之间没有显着相关性。此外，SALT评分与维生素D水平之间没有显着相关性这得到了Yil- maz等人[5]d 'Ovidio等人[9]的支持另一项研究也发现，不同脱发模式的患者及其血清25（OH）D浓度之间无显著差异[22]。相反，Cerman等人[23]最近的一项研究发现，根据SALT评分，低25（OH）D水平与AA严重程度之间存在显著的负相关性。这些研究之间的这种不一致可能有几种解释。方法上可能存在差异。血清25（OH）D具有明显的季节性变化。本研究和Yilmaz等人的研究[5]是在夏季对少数病例进行的，而Cerman等人的研究[23]则是在冬季入组了更多病例其次，本研究和Yilmaz等人[5]研究中的大多数患者均为SALT评分25%的患者，因此难以在统计学上研究与血清维生素D水平的相关性最后，研究的患者数量较少。这可能是由于研究疾病的性质，因为AA的全球患病率约为0.1%[29]。因此，这不是一种常见的疾病，曼苏拉大学医院皮肤科门诊的可用病例数量不时变化。此外，研究组在疾病过程中的选择性也减少了病例数。由于本研究严格的入选和排除标准，许多病例未被纳入。此外，所研究的调查费用高昂也造成了限制。但是，可以外推更大的病例组。虽然研究组很小，但它代表了所研究的疾病。其中轻、中、重度病例及AA评分不同级别者在患者组中均有代表性。此外，研究时间较长、招募方式不同（例如与其他诊所合作）、资金和设施较多的大型群体研究是必要的作为有力的统计方法。本研究还有一些其他限制。未纳入补充维生素D以评估疾病严重程度和扩展的亚组。最后，维生素D水平只测量一次，不考虑种族，肤色或阳光照射，这可能会使结果产生偏差。总之，血清25（OH）D水平显着低于对照组的基础上，本研究的结果在我们的地方30例AA患者局部维生素D类似物和全身性维生素补充治疗AA的可能疗效应进行彻底调查。利益冲突我们还声明，我们与本文没有利益冲突这项研究没有收到任何具体的14N.M.M. Darwish等人 /埃及基础与应用科学杂 志 4（2017）9-14公共、商业或非营利部门资助机构的赠款引用[1] Alzolibani AA.斑秃的流行病学和遗传学特征（一）。Acta Dermatovenerol AlpPannonica Adriat2011;20（4）：191-8.[2] Papadopoulos AJ，Schwartz RA，Janniger CK.斑秃。发病机制、诊断和治疗。美国临床皮肤病学杂志2000;1（2）：101-5。[3] AmorKT，Rashid RM，Mirmirani P. 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