TP53多态性与埃及患者肝细胞癌相关的研究

埃及生物多样性和生物多样性科学杂志1（ 2014）9E15可在www.sciencedirect.com在线获取ScienceDirect杂志主页：http://ees.elsevier.com/ejbas/default.aspTP53多态性作为丙型肝炎病毒感染的埃及患者肝细胞癌Mustafa A.作者：Neamatallaha，Mohamed Amr El-Missiryb，Mohammed M.A.Saida，Mahmoud Elbendaryc，Azza I.奥斯曼b，Omar A. Ammard，*a埃及曼苏拉曼苏拉大学医学院生物化学系b埃及曼苏拉曼苏拉大学理学院动物学系c埃及曼苏拉曼苏拉大学医学院热带医学系d埃及曼苏拉德尔塔科技大学牙科学院生物系A R T I C L E I N F O文章历史记录：2013年12月5日收到2014年1月2日接受2014年2月4日在线发布保留字：TP53多态性慢性丙型肝炎肝细胞癌AB S T R A C T背景和目的：肝细胞癌（HCC）是世界范围内最常见的恶性肿瘤之一TP53基因的多态性在HCC中起重要作用。本研究旨在探讨TP53基因Arg72Pro多态性在不同肝病分期的慢性丙型肝炎患者发生肝癌中的作用。受试者方法：本研究包括69例HCC患者，101例肝硬化（LC）患者和46例健康，无关，年龄匹配的志愿者作为对照，来自同一地点的埃及。HCC和LC患者均存在HCV感染。采用PCR-限制性内切酶（PCR-RFLP）技术检测72位密码子Arg 72 Pro多态性。结 果 ：与LC相比， Proline等位基 因显著增加HCC的发生 风险（ OR 2.461，95%CI1.391e4.3558 ， P<$0.002 ， Z*<$3.094 ） 。 变 异 基 因 型 也 与 HCC 的 风 险 相 关 （ Pro/Pro ： OR 3.7956 ， 95% CI 1.9228e 7.4923 ， P<0.0001; Arg/Pro ： OR 2.099 ， 95% CI1.0911e 4.0383，P<0.0263; Arg/Arg：OR1.9594，95%CI 1.0023e 3.8306，P<0.0492）。与LC组或对照组相比，HCC组的血浆TP 53水平显著降低（P<0.000）。结论：本病例对照分析证实TP 53密码子72的Pro/Pro（C/C）基因型和Pro（C）等位基因与HCV感染者发生HCC的风险增加相关。此外，数据表明，血浆TP53水平在HCC中下调。版权所有？2013，曼苏拉大学.制作和主办Elsevier B.V.所有权利reserved.缩略语：HCC，肝细胞癌;LC，肝硬化; TP 53，肿瘤抑制基因p53; Arg，精氨酸; Pro，脯氨酸; SNP，单核苷酸多态性; HCV，丙型肝炎病毒。* 通讯作者。联系电话：电话： 1092488811电子邮件地址：omarammar1987@yahoo.com（O.A. Ammar）。2314- 808 X/$e见前页版权所有2013年，曼苏拉大学。制作和主办Elsevier B.V.保留所有权利。http://dx.doi.org/10.1016/j.ejbas.2014.01.00110埃及生物安全和生物多样性科学杂志1（ 2014）9E151.介绍肝细胞癌（HCC）是全球第五大常见癌症，也是第三大癌症死亡原因，仅次于肺癌和胃癌[1]。由于其高死亡率，患病率和死亡率大致相等[2];然而，这些值在不同国家之间存在差异。大多数HCC病例发生在亚洲[3]。HCC的发生是多因素的，由环境因素（可能是病毒性肝炎）和宿主因素（遗传因素）的相互作用引起[4]。丙型肝炎病毒（HCV）感染是一个重要的全球性健康问题，也是终末期肝病如肝硬化（LC）和HCC的主要原因。大多数HCV感染者会成为慢性肝炎患者;其中一些人在随访数年后可能会发展为肝硬化，随后会发展为HCC[5]。在遗传因素中，TP 53基因的多态性与HCC相关;然而，它们对肝病进展的影响仍然存在争议[6]。TP53是一种肿瘤抑制基因（OMIM no.191170）位于染色体17p13.1上，编码一个53-kDa的核磷蛋白，其在保护人类基因组的完整性方面起着核心作用[7]。在细胞中，TP53蛋白与DNA结合，刺激DNA的产生位于TP53基因的外显子4，这是一个含有很少突变的区域。TP53蛋白在氨基酸72处表现出常见的多态性，导致精氨酸（Arg）残基（CGC）被脯氨酸（Pro）残基（CCC）取代，命名为TP53 Arg72Pro（ace no dbSNPID：rs1042522）[10]。本研究的目的是探讨HCV感染患者TP53 Arg72Pro多态性与HCC风险之间的关系。此外，我们还研究了TP53 Arg72Pro多态性与HCC患者的血浆TP53水平2.受试者和方法这是一项以医院为基础的病例对照研究，包括69例HCC患者，101例LC患者和46例健康志愿者作为对照。HCC和LC患者均存在HCV感染。所有患者均于2012年1月至2013年3月期间从曼苏拉大学热带医学系诊所招募。在研究之前，所有参与者都签署了知情同意书。此外，还获得了当地卫生部门伦理和科学委员会的批准。蛋白质，p21。 P21与细胞分裂刺激因子相互作用蛋白（cdk2），其充当肿瘤抑制蛋白。P53基因突变和多态性与癌症广泛相关[8]。由于TP 53功能的丧失被认为是多阶段肝癌发生中最重要的步骤，因此TP53是降低HCC风险的潜在候选者[9]。密码子72多态性是3.入选标准所有69例HCC患者均被诊断为HCC，基于三期CT扫描 ， 局 灶 性 病 变 的 阳 性 组 织 学 发 现 或 甲 胎 蛋 白（AFP）水平升高（≥400ng/ml），结合至少一个血管造影阳性图像图1e Tp53基因第72位密码子的基因分型（A）溴化铵染色1.5%琼脂糖凝胶，用于在用BSTUI酶消化后的不同基因分型1[梯形，2[空白，3[未消化的PCR产物，4，5[ Pro/Pro，6[ Arg/Pro，7，8[ Arg/ Arg。（B）测序分析。1[ Arg/Pro，2[ Pro/Pro，3[ Arg/Arg。11埃及生物多样性和生物多样性科学杂志1（ 2014）9E15超声波检查和/或高分辨率对比度计算机成像。此外，进行超声引导下肝活检，并测量至少两条肝组织2cm长。用苏木精-伊红染色和Mason三色染色制备肝脏标本用于组织学评价。所有的患者都是新诊断的，以前未经治疗（既没有化疗也没有放疗），没有任何其他癌症。101例无HCC证据的LC患者的选择标准通过组织学或结合临床、实验室和内镜检查来确定。通过三期CT扫描上无局灶性病变和AFP水平（400 ng/ml）确定无HCC。研究中纳入的LC患者既往无癌症病史，且在性别和年龄上与病例频率匹配。HCC和LC患者的抗-HCV Ab（第三代）试验均为阳性另外，从他们的血清中提取HCV RNA此外，对所有血清样本进行了胆红素（ 总 直 接 胆 红 素 ） 、 天 冬 氨 酸 氨 基 转 移 酶（AST/GOT）、丙氨酸氨基转移酶（ALT/GPT）、白蛋白（Alb）、碱性磷酸酶（ALP）和甲胎蛋白的实验室检查。排除标准包括自身免疫性肝炎、HBV、饮食性黄曲霉毒素、酒精、脂肪肝、肥胖和糖尿病。本研究经曼苏拉大学科学和医学院伦理委员会批准后进行。4.采集血样要求所有受试者禁食至少12 h。抽取10 ml血液样本。将5 ml该样品转移至含k 2 EDTA的离心管中。将1 ml这种EDTA抗凝的血液样品储存在-30℃下用于DNA提取，而剩余的4 ml用于获得血浆用于测量血浆TP 53水平。从抽取的血样中取出剩余的5 ml，科 学 有 限 公 司 ， Stone ， Stafford Shire ， st 150 SA ，UK），使用购自Fermentas International Inc.的Taq-PCR反应混合物，加拿大为每个样品制备PCR混合物，该混合物含有约2 ×准备好的主混合物、25pmol正向引物50-TGAGGACCTGGTCCTCTGACT-30 、 25pmol 反 向 引 物 50-AAGAGGAATCCCAAAG TTCCA-30和100ng模板DNA。 热循环条件为95 ℃初始变性5 min，然后是94 ℃ 30 s、55 ℃60 s和72℃ 30 s的35个循环，最后在72 ℃延伸10 min。使用1.5%溴化乙锭染色的琼脂糖凝胶对PCR产物进行电泳。然后将PCR产物在37℃下用BstUI限制酶（Fermentas，Canada）消化过夜。然后将消化的产物在2%琼脂糖凝胶上电泳，并在溴化乙锭染色后在UV光下可视化。使用凝胶记录系统（Chemi XRS凝胶记录系统）进行基因分型，如下：Pro/Pro给出416 bp的单一条带，Arg/Arg给出161 bp和263 bp的两个条带。所有样品在两个不同的PCR和消化组中进行两次基因分型根据制造商的标准方案，使用ABI Prism®7.血浆TP53水平使 用 人 TP 53 ELISA 试 剂 盒 （ Immuno-Biologicallaboratories ， Inc. ， 8201 Central Ave NE ， Suite P ，Minneapolis ， MN 55432 ） 。 该 测 定 采 用 定 量 夹 心ELISA技术，其测量血浆中的TP 53。根据制造商的说明进行。在板ELISA读数器（Tecan，日出Absorbancereader）上在450 nm波长下读取每个样品的吸光度使其凝结15分钟，并以7000 rpm离心15分钟。10分钟以实现血清分离，随后测定：肝酶（GPT、GOT和碱性磷酸酶）活性和血清总胆红素、直接胆红素、白蛋白和甲胎蛋白水平。8.统计分析使用Excel程序和社会科学统计软件包（SPSS）程序版本10对数据进行统计分析。数据报告为是说定量数据的标准差（SD），以及5.从血液样品根据制造商的方案，使用DNA提取试剂盒（AxyPrepBlood Genomic DNA Mini-prep Kit）从外周全血中提取基因组DNA将提取的DNA储存在-20°C下直至进一步使用。采用PCR-限制性片段长度多态性（RFLP）方法检测TP 53基因型。作为定性数据的频率和比例分析数据以检验组间的统计学显著性差异。对于定量数据，使用Student非配对t检验来比较两组。单因素方差分析检验用于比较两组以上采用卡方检验比较定性资料。如果<在95%的置信区间0.05，则P具有显著性。第九章结果6.TP53 Arg72Pro基因分型多态性聚合酶链反应（PCR）是在DNA热循环仪（Barloworld公司生产的FTC-312型，FTC 3102 D型）中进行的琼脂糖凝胶图像表示使用限制性内切酶BstU I对LC、HCC和健康对照的TP 53 Arg 72 Pro多态性的PCR-RFLP分析（图1A）。 1.A）。Pro等位基因在密码子72处不被BstUI切割，并且具有与BstU I相同的基因型。12埃及生物安全和生物多样性科学杂志1（ 2014）9E15表1e HCC vs.所有变量中的LC控制（46）数量（%）LC（101）数量（%）HCC（69）数量（%）意义性别：年龄TP 53水平AlbT. 比尔D.比尔GPTGOTALPAFPMF36人（78.3%）10人（21.7%）平均值± SD49.610.5节1066.17399.734.40.5个单位2.00.80.12零点零二27.05.323.9 4.38.8 3.66.8一点九75人（74.3%）26人（25.7%）525.2 174.382.6 0.63.50.31.50.243.22.953.9 4.08.428.15.259人（85.5%）10人（14.5%）55.66.2249.64 93.027.80.5个单位3.70.351.22.457.6第3.6节1121.2 180.9c2¼3.1，P¼0.08t<$0.3，P<$0.6P≤0.001t≤6.0，*P≤ 0.001Z*¼ 6.7，*P≤ 0.001Z*¼ 6.4，*P≤ 0.001Z*<$3.1，*P<$0.002Z*¼ 1.5，P¼0.14Z*¼ 6.2，*P≤ 0.001Z*¼ 10.2，*P≤ 0.001Alb：白蛋白，T.Bil：总胆红素，D.Bil：直接胆红素。GPT：谷氨酰丙酮酸转氨酶，ALP：碱性磷酸酶。GOT：谷氨酰草酰乙酸转氨酶，AFP：甲胎蛋白。LC组与HCC组比较P<0.05，差异有显著性。不显著：P>0.05。显著性：*P<0.05。*Z ：Manne Whitney检验。n：病例患者或对照受试者总数t：测试用于年龄。所有P值均为双侧。条带长度为414 bp。Arg等位基因被BstU I切割并产生两个小片段（263 bp和264 bp）。161 bp）。因此，杂合子具有三条带（414 bp、263 bp和161 bp）。直接测序数据证实了PCR-RFLP分析的结果（图1）。 1.B）。TP 53基因在密码子72处表现出常见的多态性，导致Arg残基（CGC）被Pro（CCC）取代，这是由于TP 53外显子4中密码子72的第二位置处的常见鸟嘌呤（G）/胞嘧啶（C）单核苷酸多态性（SNP）。存在三种基因型：精氨酸纯合子（Arg/ Arg）、脯氨酸纯合子（Pro/Pro）和杂合子（Pro/ Arg）。外显子4的Arg72Pro多态性在所有组中进行了基因分型。第一组包括46名正常健康对照者（男36名，女10名第二组包括101名LC患者（75名男性和26名女性），他们患有长期慢性肝病，并且没有与HCC相关的局灶性病变的体征和症状第三组包括69名HCC患者（59名男性和10名女性）。描述性临床和实验室数据见表1。与对照组相比，HCC组和LC组血浆TP 53水平均显著升高。此外，肝细胞癌组肝酶活性、血清总胆红素、血清直接胆红素和血清甲胎蛋白水平均较对照组和肝细胞癌组显著升高。健康对照组Arg/Arg、Arg/Pro和Pro/Pro基因型频率在LC组中，这些频率分别为51.5%、25.7%和22.8%，而在HCC组中，这些频率分别为21.7%、40.6%和37.7%。肝癌组（Arg，0.42; Pro，0.58）与肝硬化组（Arg，0.64;Pro，0.36）和对照组（Arg，0.70; Pro，0.30）相比，差异有显著性（P≤0.001）。Pro/Pro基因型和Pro等位基因分别为：在HCC组中更常见。Arg/Arg基因型和Arg等位基因频率在健康组中较高，如表2所示。TP 53密码子72变异基因型与HCC发生之间的相关性显示，与脯氨酸等位基因相关的总体风险为OR 1/42.461，95%。CI：1.391e 4.3558，相对风险为1.5116，95% CI：1.156e 1.9754。与脯氨酸等位基因携带相关的风险为OR1/4 1.986 ， 95% CI ： 1.1651e 3.3857 ， P 1/40.0081 和c2/45.57，相对风险为1.1138，95% CI：1.0862e 1.919，P<0.0112和c21/46.42。变异基因型也与HCC风险相关（Pro/Pro：OR1/4 3.7956 ， 95%CI ： 1.9228e 7.4923 ， P1/40.0001;Arg/Pro ： OR1/4 2.099 ， 95%CI ： 1.0911e 4.0383 ， P 1/40.0001）。表2e TP53 Arg72Pro多态性的基因型分布和等位基因频率控制数量（%）LC数量（%）HCC数量（%）意义野生型（GG）23（50.0）52（51.5）15（21.7）c2¼15.1，P≤0.001c2¼16.5，P≤0.001杂合子（GC）18（39.1）26（25.7）28（40.6）罕见等位基因（CC）5（10.9） 23（22.8）26（37.7）等位基因频率G64（69.6）130（64.4）58（42.0）C28（30.4）72（35.6）80（58.0）PIC0.330.310.37纯合子百分之六十点九百分之六十五点七百分之五十六点八PD百分之五十九百分之五十五百分之六十五哈迪和温伯格13埃及生物多样性和生物多样性科学杂志1（ 2014）9E15C20.261.1042.532P0.610.2930.111PIC/4多态性信息含量，PD/4辨别力。n病例患者或对照受试者总数。GG：Arg/Arg GC：Arg/Pro CC：Pro/Pro。14埃及生物安全和生物多样性科学杂志1（ 2014）9E15表3e TP53密码子72变异基因型与HCC和LC组之间的关联变异风险或低95% CI高统计值Fisher精确概率检验GG（Arg/Arg）GC（ Arg/Pro ）CC（Pro/Pro）C等位基因总C1.95942.0993.79561.9862.4611.00231.09111.92281.16511.3913.83064.03837.49233.38574.3558Z¼1.967Z¼2.221Z¼3.844（c2）5.57（Z*）3.0940.04920.02630.00010.00810.002OR/4比值比，CI/4置信区间，c2/4卡方，Z*/4z 统计量。P≤0.0263; Arg/Arg：或¼1.9594，95% CI：1.0023e 3.8306，P1/40.0492）（表3）。与健康对照组或LC组相比，HCC组的血浆TP 53水平显著升高。如表4所示，在所有组中，与GG基因型相比，CC基因型的血浆TP 53水平显著增加。在所有组中，与G等位基因携带者相比，至少一个C等位基因（GC，CC）携带者的血浆TP 53水平显著增加。类似地，如表5所示，与健康对照组或LC组相比，HCC组中至少一个C等位基因（GC、CC）的携带者和G等位基因携带者的血浆TP 53水平显著更高。多种因素：环境因素（可能是肝炎病毒）和宿主因素（包括遗传因素）的相互作用[12]。TP53调节大量基因（>100个基因），这些基因控制许多关键的肿瘤抑制功能，如细胞周期停滞、DNA修复、衰老和凋亡[13]。虽然TP 53的激活通常导致细胞凋亡，但TP 53失活促进肿瘤进展; TP 53突变的失活发生在超过50%的癌症中[14]。在这项研究中，Arg72Pro的外显子4，在TP53基因的单核苷酸多态性，已被调查，其可能的作用，在HCV感染患者的HCC的发展。这项研究的结果表明，TP53基因Arg72Pro多态性与肝癌的发生、发展有密切关系。TP 53-Pro72变体的总体风险比较LTC的OR值为 2.461，95%CI：1.391 e4.3558，相对危险度为2.461，95%CI：1.391e4.3558，10.讨论人肝癌是世界范围内最常见的恶性肿瘤之一。然而，迄今为止没有有效的治疗方法。迫切需要鉴定用于预测疾病过程和用于新的治疗方法的分子标志物[11]。HCC的发展取决于风险为1.5116，95% CI：1.156e 1.9754。TP 53-Pro72变体携带风险为OR 1/4 1.986，95% CI：1.1651e 3.3857，P1/40.0081和c2/45.57，相对风险为1.1138，95% CI：1.0862e 1.919，P1/40.0112 和 c2/46.42 。 变 异 基 因 型 也 与 HCC 风 险 相 关（ Pro/Pro ： OR1/43.7956 ， 95% CI ： 1.9228e 7.4923 ，P1/40.0001; Arg/Pro ： OR1/42.099 ， 95% CI ： 1.0911e4.0383，P1/40.0263; Arg/Arg：OR1/ 41.9594，95% CI：1.0023e 3.8306，P1/40.0492）。 在HCC患者中，Arg/Arg、Arg/Pro和Pro/Pro基因型的频率分别为表4e所有研究组中血浆TP 53水平与TP 53密码子72基因型之间的关联GG分型GCCCANOVAP1值控制N231850.0003是说1257.96996.72434.00a、bSD477.58289.54132.32LCN5226230.000是说646.77c471.00a，c311.61a、bSD190.40147.16119.01HCCN1528260.000是说435.47c210.07a、c、d185.04a、c、dSD132.646.4397.32ANOVA0.0000.0000.000P2值所有结果均表示为平均值标准差（SD）。不显著：P>0.05。显著性：P0.05。0.05。显著性：P0.05。<所有组中GG和GC之间的P1/4显著性高于对照组、LC组和HCC组之间的P2/4显著性a对照组与LC或HCC组之间的显著性。bLC和HCC组之间的显著性。15埃及生物多样性和生物多样性科学杂志1（ 2014）9E15在 LC 组 分 别 为 51.5% 、 25.7% 和 22.8% （c2/415.1 ，P≤0.001）。HCC患者的等位基因频率（TP 53-Arg 72变异体，0.42; TP 53-Pro72变异体，0.58）与LC对照患者的等位基因频率（TP 53-Arg 72变异体，0.64; TP 53-Pro72变异体，0.36）显著不同（c2/416.5，P≤0.001）。这些结果 支 持 先 前 的 数 据 [15e18] ， 该 数 据 报 道 了 TP53Arg72Pro多态性与HCC风险增加之间的关联。TP 53在DNA损伤后的细胞周期停滞和细胞凋亡中至关重要;其功能的改变可能加速从慢性肝病向HCC的进展[19]。已显示TP53定位于线粒体的外膜和内膜两者[20]。TP 53-Arg 72变体在诱导细胞凋亡和保护细胞免于癌症发展方面比TP 53-Pro72变体更有效这可能是由于位于线粒体膜上的TP 53-Arg 72变体调节细胞色素C释放到胞质溶胶中的能力。细胞色素C的释放在caspase-3的激活和细胞凋亡诱导中起着关键作用这表明TP 53-Pro72变体可能是比其TP 53-Arg 72对应物更弱的肿瘤抑制剂。因此，TP 53-Pro72变体可能部分与细胞凋亡抑制相关，这是公认的肿瘤发生机制。虽然TP 53-Pro 72与脯氨酰异构酶PIN 1的结合比TP 53-Arg 72弱，但它与脯氨酰异构酶PIN 1的结合比TP这 与 Hewala[28] 报 道 的 乳 腺 癌 的 先 前 结 果 以 及Rehmann[29，30]报道的结肠癌、肺癌、乳腺癌、卵巢癌和前列腺癌的先前结果一致，证实了与健康对照相比，HCV患者中TP 53的下调TP53基因的失活主要是由于该基因的突变所致为了在含有突变型TP53的细胞中实现TP53基因应答并恢复TP53在癌细胞中的功能，提出了两种方法[28]这些策略包括功能性TP53的异位表达或突变型TP53在肿瘤细胞中的再激活。相反[31e33]，发现TP53在HCC中过表达。这些相互矛盾的结果可能是因为TP53参与了HCC发展过程中的多个步骤我们的结果表明TP53在多个阶段表达在HCC的早期阶段，TP53可能过表达，导致与健康组织相比时血浆TP53水平更高相反，在HCC的晚期，与健康组织相比，TP53下调为了解决这种模糊性，有必要扩大研究的样本量，并根据组织病理学，放射学和临床检查确定每个患者的HCC分期本 研 究 结 果 提 示 ， TP 53 基 因 第72 位 密 码 子 的Pro/Pro（C/C）基因型和Pro（C）等位基因与HCV感染患者发生HCC的风险增加相关，血浆TP 53水平下调是预测HCC的一个可行指标。更容易与抑制性蛋白iASPP（抑制剂，ASPP）[21]。这些属性还预测TP 53-Pro72具有比TP53-Arg 72更弱的凋亡潜力这种差异可以解释为什么TP53-Pro变体可能增加对HCC的易感性。此外，发现与TP 53-Pro 72变体相比，TP 53-Arg 72变体抑制原代细胞转化的程度更高[22]。我们的研究结果与这些实验结果一致。因此，TP 53-Arg 72和TP 53-Pro72的不同功能可能影响细胞周期调控、DNA修复能力、细胞凋亡、肿瘤的发生、发展，从而影响肝癌的易感性。荟萃分析的总结OR显示，携带Pro/Pro的白人个体患HCC的风险增加[23]。然而，没有发现显着的关联，利益冲突作者声明完全自由的任何问题涉及- ing利益冲突与这项工作。致谢作者感谢埃及曼苏拉大学热带医学系诊所和科学学院的工作人员在整个工作中参考文献亚洲人。 这种差异可能是由于种族差异造成的。环境因素的差异性此外，委员会认为，白人组的OR值远高于亚裔组，导致总体OR偏态[24]。相反[25E27]，报告了相反的结果。然而，这种对比应谨慎考虑。除了易感的SNPs外，基因之间的相互作用以及遗传和环境因素之间的相互作用也可能影响癌症易感性。这些发现的确认将需要使用更大样本量的进一步研究，重点是TP53 Arg72Pro在家系中的传播模式在这项研究中，血浆TP53水平显着低于肝癌组与LC组或与健康对照组相比，在肝癌此外，TP53 Arg72Pro多态性的Pro等位基因增加了HCV感染患者发生HCC的风险。这一结果[1] 杨文，李文. 全球癌症统计数据。CA Cancer2011;61：69e 90.[2] Bhaijee F，Krige JE，Locketz ML，Kew MC.南非患者非肝硬化性肝癌的肝切除术。S AfrJ Surg 2011;49：68e 74.[3] TurdeanS，Gurzu S，Turcu M，Voidazan S，Sin A. 原发性肝肿瘤临床病理特征的最新资料。RomJ MorpholEmbryol 2012;53：719e 24.[4] Lin YJ，Lee MH，Yang HI，Jen CL，You SL，WangLY，et al. 肝脏相关血清标志物对慢性乙型肝炎患者肝细胞癌风险的预测性PloS One 2013;8：e61448.[5] GhanyMG，Strader DB，Thomas DL，Seeff LB. 丙型肝炎的诊断，管理和治疗：更新。肝病学2009;49：1335e 74.[6] Vijayaraman KP，Veluchamy M，MurugesanP，Shanmugiah KP，Kasi PD. p53外显子4（密码子72）16埃及生物安全和生物多样性科学杂志1（ 2014）9E15泰米尔纳德邦南部地区（马杜赖）乳腺癌患者的多态性和外显子7（密码子249）突变。Asian PacJ Cancer Prev2012;13：511e 6.[7] Guleria K，Sharma S，Manjari M，Uppal MS，Singh NR，Sambyal V. p.R72P，PIN3 Ins16bp多态性的TP53和CCR 5？32例印度北部乳腺癌患者。Asian PacJCancer Prev2012;13：3305e 11.[8] El-Serag HB.肝细胞癌N Engl J Med2011;365：1118e27.[9] 格豪泽角癌症化学预防和营养表观遗传学：最新技术和未来挑战。Top Curr Chem2013;329：73e 132.[10] CaoZ，Song JH ，Park YK，Maeng EJ，Nam SW ，LeeJY，等. p53密码子72多态性与韩国结直肠癌易感性肿瘤2009;56：114e 8.[11] 何明 肝癌抗体治疗的进展：以磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3和mesothelin为重点。 BioDrugs 2011;25：275e 84.[12] 钟继华，向波东，马玲，尤晓梅，李立清，谢国松。微粒体环氧化物水解酶基因多态性与肝细胞癌风险的Meta分析。 PloSOne 2013;8：e57064.[13] [10]杨文，杨文，杨文.蛋白质紊乱是否有生物学代价？癌症相关突变的分析。Mol Biosyst2012;8：296e 307.[14] 梁毅，刘健，冯志.抑癌基因p53对细胞代谢的调控。CellBiosci2013;3：9.[15] 朱志忠，丛文明，刘世福，董华，朱桂生，吴美心。p53 Arg72 Pro基因纯合性是中国人肝细胞癌的潜在危险因素 WorldJ Gastroenterol 2005;11：289e 92.[16] ZhuZZ，Cong WM，Liu SF，Xian ZH，Wu WQ，WuMC，et al. p53基因多态性改变慢性乙型肝炎病毒感染非携带者而非携带者的肝细胞癌风险CancerLett2005;229：77e 83.[17] Ezzikouri S，El Feydi AE，Chafik A，Benazzouz M，ElKihal L，Afifi R，et al. 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