新型家蚕膜蛋白基因HW的融合表达与纯化策略

本文主要探讨了在分子生物学领域的一项创新性研究，即在家蚕中发现并克隆了一个新的膜蛋白基因HW。这项研究由中国科技论文在线发布，由张雅凝、陈剑清等作者共同完成，他们得到了国家863计划课题和浙江省自然科学基金的支持。研究的目标是通过融合表达和纯化技术来探索这个新基因的功能。 基因HW的特性被揭示为一个全长1230bp的cDNA序列，其开放阅读框（ORF）长度为294bp，编码出97个氨基酸，推测其对应的分子量约为10.93kDa。研究者将HW基因与家蚕杆状病毒多角体蛋白Polh基因进行了融合，将融合后的基因片段克隆到了表达载体pET-28a(+)上，以实现大肠杆菌中的融合表达。他们采用了一种策略，通过调整pH值溶解包涵体并结合镍柱亲和层析技术，对融合蛋白进行纯化。 此外，研究人员还运用Bac-to-Bac系统，将融合了多角体基因的目的基因插入到BmBacmid中，构建了重组病毒BmBacmid-Ph-HW。然后，他们成功地将这个重组病毒转染到家蚕BmN细胞中，使得目的蛋白在家蚕细胞内得到表达。结果显示，新发现的膜蛋白基因HW在两种宿主细胞——大肠杆菌和家蚕细胞中都能表达，但大肠杆菌中的表达量相对较高。多角体蛋白融合策略显著提高了HW蛋白的表达效率，并简化了纯化过程，为后续的HW蛋白结构和功能研究提供了宝贵的实验材料。 这项研究不仅揭示了一个全新的家蚕膜蛋白基因，还展示了融合表达和纯化技术在基因工程中的应用，对于理解膜蛋白功能以及开发潜在的家蚕生物反应器具有重要意义。关键词包括分子生物学、膜蛋白、HW基因、多角体融合表达、家蚕细胞以及Bac-to-Bac系统，表明了研究的核心内容和应用前景。