硅藻土辅助的高效RNA提取技术及其小RNA富集应用

"一种广泛适用的RNA提取方法" 本文介绍了一种新型的RNA提取技术，旨在克服在处理多种动植物及微生物样本时常见的RNA提取难题。RNA的高质量提取是基因表达、调控研究和基因工程的基础，但RNase（核糖核酸酶）、多糖和多酚等物质会干扰这一过程。该方法利用硅藻土对RNase的吸附性，结合聚乙烯吡咯烷酮（PVP）、高盐浓度和乙二醇丁醚等试剂，设计了一种通用的RNA提取方案。 首先，硅藻土的使用能够有效地去除样本中的RNase，这是RNA降解的主要因素之一。接着，高盐浓度有助于破坏细胞结构，释放RNA，同时抑制RNase活性。PVP可以络合多酚，防止其与RNA形成不溶性复合物，从而保护RNA不受损害。最后，乙二醇丁醚的沉淀作用有助于纯化RNA，提高其得率和完整性。 该方法在多个具有挑战性的样本中得到了验证，包括富含多糖的玉米胚乳、含有大量RNase的动物肝脏、多酚和油脂丰富的银杏、麻疯树以及木霉和酵母等微生物。实验结果显示，提取的RNA质量良好，适用于RT-PCR等后续分子生物学实验。 此外，作者还通过添加LiCl、PEG8000和NaCl，进一步优化了RNA的沉淀步骤，成功去除了RNA中的大片段，富集了小RNA，如osa-mir-156这样的microRNA（miRNA）。这些小RNA可用于miRNA克隆和其他下游实验，展示了该方法在miRNA研究中的应用潜力。 这项工作提供了一种经济、高效且适应性广泛的RNA提取技术，尤其适用于那些传统方法难以处理的样本，对于基因表达调控和小RNA研究等领域具有重要的实践意义。