"靳传涛和林陈水在2009年的浙江工业大学学报上发表了一篇关于HIV-1蛋白酶在大肠杆菌中表达的论文。他们通过重叠延伸PCR技术，优化了HIV-1蛋白酶（PR）的基因序列，使其适应大肠杆菌的翻译系统。然后，这个优化后的基因被插入到原核表达载体pET-SP-DsbA-T中，创建了一个分泌融合表达载体‘pET-SP-DsbA-PRsite-PR’。将重组载体转化到大肠杆菌BL21(DE3)中，通过添加IPTG进行诱导表达，并通过SDS-PAGE分析检测到周质蛋白的表达。DNA测序结果显示，合成的HIV-1 PR基因与预期设计的序列完全匹配，并且在周质空间中表达出了具有自切割活性的HIV-1 PR蛋白。这项研究成功地合成、克隆并表达了使用大肠杆菌偏爱密码子的HIV-1 PR的DNA编码序列，为筛选HIV蛋白酶抑制剂提供了基础。"
这篇论文详细阐述了HIV-1蛋白酶在大肠杆菌中的表达策略，主要知识点包括：
1. 重叠延伸PCR技术：这是一种分子生物学技术，用于合成较长的DNA片段，通过设计重叠的引物，使得PCR扩增的两个片段可以结合并延伸，形成全长基因。在本文中，该技术用于优化HIV-1蛋白酶的基因序列，使其更适应大肠杆菌的密码子使用偏好。
2. 密码子优化：由于不同生物体内的密码子使用频率不同，为了使外源基因在新的宿主中高效表达，通常需要对基因序列进行调整，使其符合目标宿主（这里是大肠杆菌）的密码子偏好。
3. 原核表达载体pET-SP-DsbA-T：这是一个常用的表达系统，其中pET系列是基于大肠杆菌的T7启动子驱动的表达载体，能够实现高效表达。SP-DsbA是信号肽，用于引导蛋白进入周质空间，而PRsite可能是指定的剪切位点，允许蛋白质的自切割。
4. 大肠杆菌BL21(DE3)：这是大肠杆菌的一个突变株，含有T7噬菌体的RNA聚合酶，可用于响应IPTG（异丙基-β-D-硫代半乳糖苷）诱导目的基因的表达。
5. IPTG诱导表达：IPTG是一种化学诱导剂，能激活T7启动子，从而启动目的基因的转录，进而表达目标蛋白。
6. SDS-PAGE分析：聚丙烯酰胺凝胶电泳的一种形式，常用于分离和定量蛋白质。在这里，它被用来检测重组大肠杆菌是否成功表达了HIV-1蛋白酶。
7. 周质空间表达：蛋白质通过信号肽引导，进入细胞膜之间的周质空间，这种表达方式有利于蛋白质的纯化和后续功能研究。
8. 自切割活性：HIV-1蛋白酶在表达后，能在特定位点自我剪切，这一特性在文中被证实，表明表达的蛋白具有生物活性。
9. HIV-1蛋白酶抑制剂的筛选：表达出的HIV-1蛋白酶可以用于实验筛选能抑制其活性的化合物，这对于抗HIV药物的研发具有重要意义。
这篇论文展示了如何通过基因工程手段在大肠杆菌中实现HIV-1蛋白酶的有效表达，并验证了其生物活性，为HIV蛋白酶抑制剂的筛选提供了实验平台。
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