MnSOD-P10融合蛋白表达与共结晶初筛研究

"MnSOD融合表达家蚕核型多角体病毒P10蛋白并进行共结晶条件初筛" 本文研究的是家蚕核型多角体病毒（Bombyx mori Nucleopolyhedrovirus, BmNPV）中的P10蛋白，这是一种在病毒生命周期中极晚期表达的非必需蛋白。P10蛋白虽然不直接影响病毒的复制，但它与多角体蛋白相互作用，对构成病毒囊膜和维护多角体病毒外壳稳定性起到关键作用。多角体是病毒粒子在昆虫宿主体内的储存形式，其稳定性对于病毒的传播至关重要。 研究者通过融合表达技术，将锰超氧化物歧化酶（MnSOD）与P10蛋白结合。MnSOD是一种在原核系统中高效表达且具有耐高温特性的酶，这使得它可以被用于高温纯化过程，同时保持其活性。实验中，研究人员构建了一个名为pET-28a-MnSOD-p10的重组质粒，该质粒使得P10蛋白能够与MnSOD共表达。 在完成融合表达后，利用MnSOD的耐热性进行初步纯化，接着采用Ni-NTA（镍离子亲和层析）柱进行进一步纯化。纯化后的产物通过质谱分析确认为融合蛋白，这表明融合过程成功。然后，利用MnSOD易于结晶的性质，对融合蛋白进行共结晶条件的初步筛选。成功筛选出的结晶条件为后续P10蛋白的单独结晶以及其结构解析奠定了基础。这些结构信息将进一步揭示P10蛋白在家蚕核型多角体病毒组装过程中的具体作用。 这项研究由多项国家级科研项目资助，包括国家高技术研究发展计划“863”项目和重大新药创制科技重大专项企业孵化器建设。论文作者中，张小蓓作为硕士研究生专注于基因表达与调控的研究，而张耀洲教授则是家蚕生物反应器领域的专家，并担任通信联系人。 总结起来，该研究通过融合表达和共结晶技术，探索了P10蛋白与MnSOD的结合，旨在深入理解P10蛋白在病毒生命周期中的功能，特别是它如何影响病毒外壳的稳定性和多角体的形成，这对于病毒学研究和可能的抗病毒策略具有重要意义。