hPNAS-4基因腺病毒载体的构建及体外抗肿瘤效应研究

本文发表于2009年9月的《四川大学学报(自然科学版)》第46卷第5期，作者倪睿、严飞、袁铸和李炯等人在文章中探讨了hPNAS-4腺病毒载体的构建及其在体外抗肿瘤作用。hPNAS-4是一种可能具有抗肿瘤潜力的基因，研究者首先从A293细胞中通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)克隆出其编码区cDNA。这个cDNA片段随后被酶切并连接到pENTR-II载体上，实现了与腺病毒骨架载体的同源重组。 通过这种方法，研究人员成功地构建了一个重组腺病毒质粒，其中包含了hPNAS-4基因。这种重组腺病毒被进一步通过293细胞进行包装和扩增，最终获得了携带hPNAS-4基因的活性载体。实验的核心部分是将这种重组腺病毒体外感染人肺癌细胞株A549。 实验结果显示，经过hPNAS-4基因的过表达，A549细胞中的hPNAS-4表达显著上调。这直接影响了细胞增殖，观察到细胞增殖受到了明显抑制，表明hPNAS-4可能通过抑制癌细胞的分裂来发挥抗肿瘤作用。此外，通过流式细胞仪分析，细胞凋亡率明显提高，这表明hPNAS-4可能促进了癌细胞的程序性死亡。 更为深入的分子生物学分析，如琼脂糖凝胶电泳，显示出细胞基因组DNA存在明显的梯状条带，进一步证实了hPNAS-4基因插入到宿主细胞染色体上的整合情况。综合这些数据，研究者得出结论，hPNAS-4的过表达对于A549肿瘤细胞的生长具有显著的抑制效果，并且能够诱导细胞凋亡，为hPNAS-4作为一种潜在的基因治疗策略提供了有力的实验证据。 关键词包括：PNAS-4、基因治疗、腺病毒、肿瘤、凋亡。这项研究不仅展示了腺病毒作为基因递送系统的有效性和靶向性，也提示了hPNAS-4在癌症治疗领域的潜在应用价值，为未来针对特定肿瘤类型的基因疗法研发奠定了基础。