建立TaqMan实时荧光定量PCR检测猪繁殖与呼吸综合症病毒方法
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更新于2024-08-13
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"快速实时荧光定量 pC R检测猪繁殖与呼吸综合症病毒方法的建立 (2015年)"
本文主要介绍了针对猪繁殖与呼吸综合症病毒(PRRSV)的一种快速、高精度的TaqMan基实时荧光定量PCR检测方法的开发。这种方法旨在提高PRRSV的检测速度和准确性,对于疾病防控和畜牧业健康具有重要意义。
在研究过程中,科研人员依据PRRSV的开放阅读框7(ORF7)的保守序列,设计并合成了专门的PCR引物和TaqMan探针。TaqMan探针是一种在PCR扩增过程中能实时监测荧光信号的工具,其特点是能够显著提高检测的特异性和灵敏度。研究人员在标准PCR技术基础上,进行了TaqMan探针荧光定量PCR的优化,包括反应条件、温度循环参数等,以确保检测体系的高效运行。
实验结果显示,建立的TaqMan实时荧光定量PCR体系具有高度的相关性(相关系数大于99%),扩增效率接近97%,表明该方法具有良好的线性动态范围。此外,通过对比检测猪圆环病毒2型(PCV2)、猪细小病毒(PPV)、伪狂犬病毒(PRV)、猪瘟病毒(CSFV)和日本脑炎病毒(JEV),所有结果均为阴性,验证了该方法的特异性,即只对PRRSV有反应,不会误报其他常见猪病病毒。
在灵敏度测试中,该方法能够检测到低至每微升溶液5个拷贝的PRRSV核酸,显示了极高的敏感性。这意味着即使在病毒载量很低的情况下,也能准确地检出PRRSV的存在。最后,研究人员使用新方法对58份血清样本和60份组织样本进行了检测,这进一步证实了该方法在实际应用中的可靠性。
这项研究成功开发了一种基于TaqMan技术的快速实时荧光定量PCR方法,该方法对于PRRSV的早期诊断、疫情监控以及疾病的预防和控制提供了有力的工具。对于猪场管理和兽医临床实践来说,这一方法的应用将极大地提升疾病诊断的效率和准确性,有助于降低经济损失,并保障养猪业的健康发展。
2021-07-26 上传
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论文
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