LPS诱导下THP-1细胞稳态内参基因筛选与RT-qPCR应用研究

本研究由梁俊红、曹锡梅等人进行，针对LPS（脂多糖）诱导下的THP-1细胞稳定性内参基因筛选。THP-1细胞是一种常用于免疫学研究的人源性白血病细胞系，LPS作为一种革兰氏阴性菌壁成分，能够激活多种炎症反应。该研究的主要目的是确定在LPS刺激下，THP-1细胞内哪些内参基因在表达上具有较高的稳定性和一致性，这对于定量实时定量聚合酶链反应（RT-qPCR）实验结果的校正是至关重要的。 研究采用了RT-qPCR技术，这是一种广泛应用于基因表达分析的技术，通过比较目标基因和内参基因在不同条件下的相对表达水平，评估基因表达的变化。候选内参基因包括ACTB、GAPDH、RPL37A、PPIB、PGK1、PPIA、SDHA、TBP、HPRT1和RPL13A，这些基因通常被用作内参基因，因为它们的表达被认为是恒定的，不随细胞状态变化而显著改变。 经过NormFinder和GeNorm两种常用软件的分析，研究发现GAPDH和PGK1的表达最为稳定，它们可以作为精确校正RT-qPCR结果的基准。NormFinder主要用于评估多个内参基因的稳定性，而GeNorm则用于确定在多重内参基因中最稳定的组合。研究建议，在进行后续实验时，同时考虑这两个基因，可以提高数据的可靠性和准确性。 最终结论指出，选择合适的内参基因对于RT-qPCR实验至关重要，尤其是当处理不同类型细胞和不同实验条件时。研究强调了使用两个或更多稳定内参基因的重要性，以确保得到更为可靠和准确的基因表达数据。这不仅对当前的THP-1细胞研究具有实际意义，也为其他研究者提供了在类似条件下选择内参基因的参考依据。 关键词包括RT-PCR（实时定量聚合酶链反应）、内参基因、LPS（脂多糖）、THP-1细胞、以及NormFinder和GeNorm软件，这些都是理解研究核心技术和方法的关键术语。这项工作发表在中国科技论文在线，展示了在生物学领域特别是在表观遗传学和真核基因转录调控研究中的最新进展。