构建与诱导表达His-S100A4融合蛋白载体：新工具揭示S100A4信号通路

本文主要探讨了带His标签的S100A4融合蛋白表达载体的构建与诱导表达。作者王娟、陈小欢和罗海华等人来自南方医科大学病理生理学教研室和广东省蛋白质组学重点实验室，他们旨在通过构建pET-14b-MCS-S100A4原核表达载体，将S100A4基因整合到大肠杆菌中，以便在细菌系统中高效表达并进行后续的纯化研究。 S100A4蛋白是一种重要的钙结合蛋白，含有两个EF手型结构域，其功能涉及细胞骨架稳定、细胞分化以及肿瘤的发生发展过程中的多种生物学效应。然而，关于S100A4蛋白的具体信号传导机制仍存在许多未知之处。因此，构建His-S100A4融合蛋白表达载体具有重要意义，可以作为进一步探究S100A4在细胞信号转导通路中的作用的关键实验工具。 研究方法首先是从BALB/c小鼠肝脏中提取总RNA，通过RT-PCR技术扩增出S100A4的编码序列。接着，使用常规的酶切和连接技术，将目标序列插入到pET-14b-MCS质粒中，形成重组载体。阳性克隆的验证包括酶切分析、PCR检测以及序列测定。随后，将构建的表达载体转化到BL21(DE3)大肠杆菌中，通过异丙基硫代半胱氨酸甘氨酸（IPTG）诱导His-S100A4融合蛋白的表达。最后，通过Ni2+-NTA亲和层析技术对融合蛋白进行纯化，得到了预期的16kD融合蛋白。 这一成果的实现不仅验证了构建的His-S100A4融合蛋白表达载体的有效性，也为后续深入研究S100A4的生物学功能和信号转导路径提供了稳定的实验材料。通过大肠杆菌作为表达宿主，可以大规模生产融合蛋白，便于进行大规模的生物学实验和结构研究。此外，这种策略也可应用于其他生物标记物或药物靶点的工程化表达，对于理解蛋白质功能和开发治疗策略具有广泛的应用前景。