构建与表达：本生烟PR-1蛋白原核表达载体与多克隆抗体制备

本研究论文探讨了"本生烟PR-1蛋白原核表达载体构建、表达及多克隆抗体的制备"这一关键课题。作者团队由许墨云、朱峰等组成，他们利用RT-PCR技术从本生烟（Nicotiana benthamiana）的基因组中成功克隆出PR-1蛋白的基因序列。PR-1蛋白是一种与植物病理相关的蛋白，其功能在植物应对病害时起着重要作用。 论文首先介绍了实验方法，即通过EcoR I和Not I限制性内切酶切割PR-1 ORF片段，将其整合到大肠杆菌（E.coli）表达载体pET30-c中。这个过程确保了基因片段的精确插入，并通过双酶切验证了载体的构建准确性。随后，研究人员利用BL21(DE3)大肠杆菌菌株进行转化，进一步通过酶切、质粒PCR和DNA双向测序来确认构建的成功。 在实验步骤中，通过设置IPTG终浓度为1.5 mmol/L，在37℃条件下诱导表达，利用ProbandTM Purification System进行蛋白质纯化，然后将浓缩后的蛋白用于免疫新西兰大耳兔，以制备出针对PR-1蛋白的多克隆抗体。这一过程是生物技术中常见的抗体制备方法，通过免疫动物产生针对特定目标蛋白的抗体，可用于后续的检测和研究。 论文还提到了该研究的应用前景，即制备的特异性抗血清可以用于检测烟草中的PR-1蛋白，这对于理解烟草对病原体的响应机制以及开发相关抗病策略具有重要意义。此外，文章还引用了中图分类号S432.4115，表明这是一篇关于植物病理学与分子生物学交叉领域的研究，旨在增强我们对植物与病原体互动的理解。 这篇论文提供了关于PR-1蛋白在本生烟中表达的详细步骤，以及如何通过原核表达和多克隆抗体技术对其进行研究的方法，对植物病理学和分子生物学领域的研究者具有实际价值。